viernes, 30 de enero de 2015

PRÁCTICA NO. 8 DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA

A DESARROLLARSE DEL 5 AL 9 OCTUBRE DE 2015

OBJETIVO


El alumno observará y demostrará la actividad de la catalasa presente e los eritrocitos. Observará a la vez el efecto que tiene sobre la acción enzimática la adición de substancias inhibidoras y la desnaturalización enzimática por la acción del calor.



INFORMACION GENERAL



La catalasa es una enzima de naturaleza compleja que se halla distribuida en numerosas tejidos y es particularmente abundante en los eritrocitos.

Es una de las enzimas más activas que existen en el organismo.

La función que realiza la catalasa es muy importante, ya que protege a las células de la peroxidación, es decir destruye el peróxido de hidrógeno que se forma en las células con motivo de varias reacciones de oxidación.



La reacción que cataliza la enzima es la siguiente:



2 H202---------------> H20 + 02


Es decir, la enzima transforma 2 moléculas de peróxido de hidrógeno (H202), el cual es tóxico y cáustico para la célula, hasta 2 moléculas de Agua (H20), y una de oxígeno molecular (02). 1mg de enzima pura libera cerca de 3,000 litros de oxígeno por hora.



Como cualquier otro enzima, para que efectúe su acción requiere de un pH y temperatura apropiados. La presencia de substancias inhibidoras puede traer como consecuencia la disminución de la actividad o la inactivación total de la acción enzimática.


MATERIALES REACTIVOS

1Gradilla

6 tubos de ensayo grandes

2 pipetas ml

1 mechero

1 tripie

1 tela asbesto

2 vasos p.p 250 ml

1 pinza p/tubo de ensayo

1 termómetro

2 pipetas 1 ml

2 frascos goteros

1 jeringa desechable de 3 ml Peróxido de hidrógeno al 5 %

Cianuro de Sodio al 8%

Nitrato de plomo al 5%



MATERIALES BIOLOGICOS

Sangre diluida 1 : 50

DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.


PRECAUCION: ¡CUIDADO! EL CIANURO DE SODIO Y EL NITRATO DE PLOMO SON MUY VENENOSOS, NO LOS PIPETEE. USE UN GOTERO.



1.-Tome 4 tubos de ensayo, numérelos.



2.-Al tubo rotulado como No 1 añádale 3ml de sangre diluida, colocarlo en baño María durante 10 minutos, enfriar luego con agua corriente, hasta que alcance la temperatura ambiente.



3.-Proceda como en el esquema que se muestra:



                                                Tubo 1              Tubo 2         Tubo 3           Tubo 4
Peróxido de hidrógeno             2ml                    2ml                 2ml                 2ml

Cianuro de Sodio                                                                    12 gotas

Nitrato de plomo                                                                                         12 gotas
________________________________________________________________________
Nota: antes de proceder a añadir la sangre a los tubos 2,3 y 4, considere que deberá hacerlo LENTAMENTEESCURRIENDO POR LAS PAREDES DEL TUBO, SIN AGITAR NI MEZCLAR

Sangre diluida                                                        3ml              3 ml               3ml



4.-Coloque los tubos en baño María a 37 ° C durante 5 minutos.

Observe los cambios y resultados que se producen.



**  Demostración de la actividad de la catalasa **

1.-Hay dos modelos sobre la forma en la que el sustrato se une al sitio activo de una enzima. Investíguelos y explique claramente como funcionan cada uno de ellos.

2.-  Hay algunas sustancias que pueden inhibir la acción enzimática, investigue los dos tipos de inhibidores enzimáticos  y cual es la forma de acción de cada uno de ellos.

3.- ¿En que organelos celulares se encuentra la catalasa?

4.- Si los eritrocitos carecen de orgánulos, ¿En qué parte actúa la catalasa?

5.- El cianuro de sodio actúa como  inhibidor de la catalasa, si el cianuro entrara a la circulación sanguínea luego a los tejidos y finalmente a las células....  ¿que pasaría en el organismo?


6.- La actividad de la catalasa varía dependiendo en que órgano se encuentra, ¿en cuales órganos es mas elevada su actividad y en cuales es menos activa?

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