viernes, 30 de enero de 2015

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No.5 AMINOÁCIDOS SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL

SE COMUNICA QUE LA ACADEMIA DECIDIÓ SUSPENDER LA REALIZACIÓN DE ESTA PRÁCTICA, EN SU LUGAR IMPRIMIR Y DESCARGAR LA 6. AISLAMIENTO DE CASEINA QUE SE REALIZARÁ DEL 21 AL 25 SEPTIEMBRE 2015. TRAER SU MUESTRA DE LECHE BRONCA PREFERENTE, SI O ES ASI SIRVE LA DE ENVASE DE CARTÓN .8INFORMACION ACTUALIZADA EL 15 SEPT. 2015).

AMINOACIDOS: SEPARACION POR CROMATOGRAFIA PAPEL


OBJETIVO



El alumno comprenderá el importante papel que desempeñan los aminoácidos en el cuerpo de los animales, conocerá algunas de sus propiedades y, en base a estas separara los aminoácidos presentes en una mezcla, usando la técnica de cromatografía en papel.



INFORMACION GENERAL



Los aminoácidos son los monómeros (unidades), de que están formadas las proteínas (y por ello también las enzimas).

Químicamente, se caracterizan por la presencia en su molécula de un grupo carboxilo en el carbono No 1 ó alfa, y un grupo amino, unido al carbono No 2 ó beta (de aquí su nombre de aminoácidos).



Existen en la naturaleza mas de 200 aminoácidos diferentes, sin embargo, dentro del cuerpo de los animales, solo existen 22 principales, de estos 22, 10 son considerados como esenciales.

El termino aminoácido esencial, se aplica en aquellos aminoácidos que no pueden ser sintetizados, o que son sintetizados en cantidad menor a la requerida, de ahí que forzosamente tengan que ingerirse en los alimentos que se consumen.



Para los animales domésticos revisten carácter de esencial los siguientes aminoácidos: Lisina, Triptofano, Histidina, Fenilalanina, Leucina, Isoleucina, Treonina, Metionina, Valina y Arginina



Los aminoácidos considerados no esenciales, si pueden ser sintetizados por los animales a partir de otros compuestos de la dieta.



Los animales pueden unirse entre si para formar péptidos (algunos autores consideran péptido como sinónimo de aminoácido, pero por lo general se usa el termino para designar a la unión de varios de ellos). La unión de 2 aminoácidos se designa como dipéptido, si son 3 tripéptido, etcétera. Cuando el número de aminoácidos unidos es grande, se designa como polipéptido, y si cumple ciertos requisitos, se llama proteína.



Los aminoácidos tienen diferentes propiedades físicas y químicas, las cuales pueden ser aprovechadas para diferenciarlos.

Los aminoácidos compuestos incoloros, cristalinos, a granel se presentan como polvo blanco. Las formas cristalinas son muy características y van desde agujas (tirosina), hasta placas hexagonales gruesas (cistina). El sabor varía desde dulce azucarado (glicina), pasando por el insípido (tirosina) hasta el amargo (arginina).

Tienen diferente afinidad por el agua y otro tipo de solventes, y pueden poseer carga eléctrica positiva algunos negativa otros, o bien, algunos son neutros (carecen de carga eléctrica).



El termino cromatografía fue propuesto por Tswett en 1903 para la separación de pigmentos vegetales en una columna de sílice.

Hoy en día, la técnica original ha sufrido numerosas modificaciones, mejoras y adaptaciones de tal forma que existen muchos tipos de cromatografía (de adsorción, de reparto, de intercambio iónico, de tamiz molecular), y muchas técnicas especiales para usar estos tipos (en columna, en papel, en capa fina, en gases). Algunas técnicas son muy costosas y sofisticadas, otras son sencillas y baratas.

La cromatografía puede aplicarse para separar carbohidratos, lípidos, aminoácidos, proteínas y otros compuestos.



Para esta practica, se pretende separar los aminoácidos presentes en una mezcla, por la cromatografía en papel.

Está basada en el hecho de que los diferentes aminoácidos se absorben en el papel con diferentes grados de afinidad para un solvente determinado.



MATERIALES REACTIVOS

Cámara cromatográfica Alanina

Cubeta para cámara cromatográfica Leucina

Papel Whatman para cromatografía Lisina

Estufa bacteriológica Valina

Regla Butanol

Ac. Acético

Agua destilada

Ninhidrina spray



DESARROLLO DEL EXPERIMENTO



1. 1. Preparar una tira de papel Whatman para cromatografía, marcando con un lápiz una línea de aplicación a 2.5 cm de uno de los extremos



2. 2. Colocar una gota del problema (solución de mezcla de aminoácidos), exactamente en el centro de la línea de aplicación. Deje secar en el aire



3. 3. Colocar el papel en la cubeta de la cámara cromatográfica.

La cubeta deberá contener al liquido solvente (Butanol - Ac. Acético - Agua destilada 4:1:1)



4. 4. Después de hora y media quitar las tiras de la cámara, marcar el frente del solvente (con lápiz), y dejar secar las tiras a temperatura ambiente







5. 5. Asperjar las tiras con una solución de ninhidrina en spray.

Secar al aire



6. 6. Colocar las tiras en la estufa a 100° C durante 10 minutos.



7. 7. Con la ayuda de una regla, medir la distancia a la que avanzo el solvente con relación a la línea de aplicación y anotar el valor. Medir también la distancia de las manchas (las cuales representan los diferentes aminoácidos, con respecto a la línea de aplicación.)



8. 8. Calcular el valor de Rf (Rf representa la relación de distancia a que se ha movido un aminoácido con respecto a la distancia en que se ha movido el solvente). Este valor Rf, es especifico para cada aminoácido y para un solvente determinado, de aquí que podamos identificar de que aminoácidos se trata al comparar sus valores de Rf.





                   Distancia a que se movió el aminoácido
Rf = ----------------------------------------------------
                  Distancia a que se movió el solvente



Valor Rf Aminoácido al que corresponde este Rf (Con solvente Butanol 4: ac.- acético 1: agua 1)

0.14                     Lisina

0.38                     Alanina

0.60                    Valina


0.73                    Leucina

CUESTIONARIO

1.- Investigue en que se basa la técnica de cromatografía y para que se usa

2.- Investiga a que se debe la aparición del color púrpura al rociar con ninhidrina el papel.


3.- ¿Qué aminoácido se absorbió mas fuertemente y porque? 

No hay comentarios:

Publicar un comentario