martes, 16 de agosto de 2011

AVISO MUY IMPORTANTE

BIENVENIDOS ALUMNOS Y MAESTROS AL BLOG DE LAS PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA CURSO AGOSTO 2014.

MAESTR@S TOMAR EN CUENTA QUE POR CAUSAS DE FUERZA MAYOR, DEBIDO A QUE SE DEBEN FINALIZAR LAS PRÁCTICAS EN MES DE OCTUBRE. SE TUVO QUE REPROGRAMAR EL CALENDARIO ORIGINAL.

PONER ATENCIÓN A QUE EL NÚMERO QUE TIENE LA PRÁCTICA ASIGNADO REPRESENTA LA SECUENCIA EN QUE SE VA A REALIZAR, SE SEÑALA A LA VEZ LA FECHA EN QUE DEBE DE REALIZARSE LA PRÁCTICA.

EN LA ULTIMA SEMANA (27 A 31 OCTUBRE) SE REALIZARÁN DOS PRÁCTICAS 

EL BLOG ESTA ACTUALIZADO AL 22 AGOSTO 2014, CONTIENE CASI TODOS LOS CAMBIOS, EXCEPTO LA PRÁCTICA RELATIVA AL TEMA DE LÍPIDOS (20-24 Octubre). ACTUALMENTE ESTA EN BLANCO PORQUE LA ACADEMIA ESTA ELABORANDO LA PRACTICA A REALIZAR.

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 11 (AC.NUCLEICOS) Y 12 (VITAMINAS

A REALIZARSE LA SEMANA 27 A 31 OCTUBRE 2014


PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No. 12




ACIDOS NUCLEICOS: AISLAMIENTO DE ADN A PARTIR DE HEPATOCITOS



OBJETIVO:




El alumno aislara el ácido nucleico desoxiribonucleico (ADN) a partir de células hepáticas (hepatocitos) e identificara por pruebas colororimétricas algunos de sus componentes básicos.



INFORMACIÓN GENERAL:



Existen 2 tipos principales de ácidos nucleicos: El ADN ( ácido desoxiribonucleico) y el ARN (acido ribonucleico).Los ácidos nucleicos son biopolímeros sumamente importantes dentro de las células, su principal función es participar en la síntesis de proteínas, y además, participar en los fenómenos de reproducción celular, en cuanto a su estructura química, los ácidos nucleicos constan de la unión de numerosos nucleótidos, estos nucleótidos estan formados por una base nitrogenada que puede ser ; purica ( adenina o guanina) o bien pirimidinica (citosina, timina o uracilo), constan también de un azúcar pentosa (ribosona o desoxirribosa ), y además fósforo.



El ácido desoxiribonucleico o ADN para el caso de las células eucarióticas se encuentra principalmente dentro del núcleo, aunque una pequeña porción del mismo se encuentra dentro de las mitocondrias, el ADN tiene una estructura tridimensional de una doble hélice, en la cual las bases nitrogenadas se encuentran siempre apareadas Guanina con Citosina y Adenina con Timina, se estima que el genoma humano haploide contiene alrededor de 3,000 millones de pares de bases.



Materiales Reactivos

Trozo de Hígado

Cuchillo

Licuadora

Gasa

Embudo Buchner

Bomba de vacío

Vaso pp 250 ml (2)

Varilla de vidrio

Probeta 50 ml (2)

3 tubos ensayo 10x12 mm

Pipeta Pasteur

3 pipetas 1 ml

Centrífuga

Tubos de polirtileno50 ml para centrífuga

Palillo de madera (largo)

Hielo



Sal común

Solución detergente sulfato lauril sódico

Proteasa

Alcohol etílico

Äcido sulfúrico

Reactivo de Bial

Molibdato de amonio

Reactivo de Fiske-Subarow







Desarrollo del experimento



1.-Pesar 50 gramos de hígado, cortarlo en trozos pequeños, pasarlos a un vaso de licuadora y añadir 100 ml de agua destilada fría más 10 gramos de sal común.



2.-Licuar a máxima velocidad por aproximadamente 30 segundos



3.-Filtrar a través de una capa fina de gasa colocada sobre un embudo Buchner, usar bomba de succión en caso de que sea necesario



4.-Pasar el filtrado a un vaso de precipitados de 250 ml y añadir 25 ml de solución detergente.



5.-Mezclar por 3 minutos lentamente y con cuidado el filtrado y la solución detergente usando una varilla de vidrio, IMPORTANTE TRATAR DE NO HACER ESPUMA AL MEZCLAR



5.-Dejar reposar la mezcla durante mínimo 10 minutos



6.-Pasar la mezcla a un tubo de ensayo llenando solamente 1/3 del volumen del tubo de ensayo y añadir una pizca o pequeña cantidad de enzima proteasa, agitar el tubo suavemente. PRECAUCIÓN SI SE AGITA CON VIOLENCIA SE VA A ROMPER EL ADN, VA A SER DIFICIL VERLO



7.-Ladear el tubo de ensayo y lentamente y por las paredes del tubo ir virtiendo alcohol etílico frío en una cantidad igual al volumen del filtrado que ya hay en el tubo.

PRECAUCION, LA ADICIÓN DEL ALCOHOL SE HACE LENTAMENTE Y POR LAS PAREDES DEL TUBO.



8.-Dejar reposar la mezcla por 30 minutos mínimo



9.- Colectar el ADN usando un palillo largo de madera para extraerlo del tubo





Resultados esperados



Si el procedimiento fue llevado a cabo de manera apropiada tal y como se describe en la práctica , observaras que el ADN (en forma de una sustancia blanca filamentosa, de aspecto viscoso) se desprendió de la muestra y se eleva hasta la superficie de la capa de alcohol, desde donde puede ser recuperada usando el palillo.



HIDRÓLISIS DEL ADN E IDENTIFICACIÓN DE SUS COMPONENTES





A.- IDENTIFICACIÓN DEL AZUCAR PENTOSA



1. Tome 0.2 gr. Del precipitado obtenido, colocarlo en un tubo de ensayo y añadirle 2 ml. De H2SO4 13 N.



2. Hierva a la flama del mechero ( suavemente ), agitando , durante 10 min.



3. Retire con una pipeta pasteur una pequeña porción del hidrolizado



4. Coloque 6 gotas del hidrolizado en un tubo de ensayo pequeño



5. Añada 0.5 ml de reactivo de Bial y agite.





RESULTADOS ESPERADOS



La presencia de azúcar pentosa ( desoxiribosa), que contiene el ADN, se manifiesta por la aparición de un color verde azuloso, debido a la reacción del furfural (producido al usar H2SO4 sobre el carbohidrato), mas el orcinol que contiene el reactivo de Bial.



B.- IDENTIFICACIÓN DE FOSFATO



1. Tome con una pipeta pasteur aprox. 1 ml del hidrolizado y pasarlos a un tubo de ensayo



2. Añada 0.5 ml. H2SO4 10 N y 1 ml. De molibdato de amonio al 2.5%



3. Añada 1 ml. De reactivo de fiske-subarow y dejar reposar 10 min.







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PRÁCTICA NO. 12 VITAMINAS: DETERMINACION DE LA VITAMINA C EN LA ORINA


OBJETIVO:

El alumno cuantificara loa cantidad de ácido ascórbico (vitamina c) excretada en la orina, por el método de Tillmans.

INFORMACION GENERAL

La vitamina c o ácido ascórbico, es una vitamina hidrosoluble, ampliamente distribuida en los vegetales verdes, y en las frutas sobre todo en las llamadas cítricos como limón, naranja, etc.). Es altamente soluble en agua, pero muy inestable. Puede formar cristales incoloros, con un punto de fusión de 190-192 °C.

La vitamina C es sintetizada por todos los animales domésticos, excepto por el cobayo. El hombre al igual que el cobayo, carece de la enzima clave para efectuar la síntesis de la vitamina, (la 1-L gunolactona oxidasa), de aquí que en la dieta que consume el hombre, deba estar presente la vitamina para evitar deficiencias.

La deficiencia de vitamina C en el hombre, produce la enfermedad conocida como escorbuto, la cual era bastante común hace algunos años (sobre todo en los marineros), cuando se desconocían las causas de esta enfermedad. El escorbuto se manifiesta por lesiones en las encías principalmente, se produce un agrietamiento de estas, debido a que la vitamina c es necesaria para la formación de colágeno.

La vitamina c aumenta la capacidad respuesta del sistema inmune de los animales.

Otras funciones que desempeña la vitamina, es la de actuar como reductor (en esta propiedad se basa el método para detectarla).

En el caso del hombre, la vitamina c como ya se mencionó, no se sintetiza, por lo tanto debe ingerirse con los alimentos que consumimos. En una dieta típica, existe mayor cantidad de vitamina que la que requerimos, y debido a que esta vitamina no puede almacenarse en el cuerpo, se elimina en la orina. La ingestión normal diaria para un adulto oscilara entre 20-80 mg/día, de los cuales un 50%se elimina en un periodo de 24 horas por la orina. En casos de deficiencia de vitamina c, o en infecciones severas, la vitamina pudiera o detectarse en orina.

FUNDAMENTO PARA LA DETERMINACION DE VITAMINA C

El ácido ascórbico es oxidado por el colorante 2,6 diclorofenolindofenol, a su vez este

colorante es reducido por el ácido ascórbico a un compuesto incoloro, pudiendo entonces calcular la cantidad de colorante reducido, la cual es proporcional a la cantidad de vitamina c presente en la orina.

Debido a que en la orina existen otras substancias que pudieran reducir al colorante, se acidificara la orina para que, si están presentes estas substancias, reaccionan muy lentamente con el colorante.


MATERIALES


Un vaso de p.p. 250ml

2 pipetas de 10 ml

2 pipetas 1 ml

1 vaso p.p 100 ml

1 embudo

1 agitador

1 bureta 25 ml

1 soporte para bureta

1 pinza para bureta

REACTIVOS

Acido acetico al 50 %

Colorante 2,6 diclofenol indofenol (80 mg/100 ml)


MATERIAL BIOLOGICO

Orina recién evacuada


DESARROLLO DEL EXPERIMENTO


1.- Medir en una probeta el total de orina excretada. Anotar dicho volumen.

2.- Pasar la orina a un vaso de precipitados, y añadirle una gota de ácido acético.


3.- En otro vaso de precipitados de 100ml añadir 0.5 ml de colorante 2,6 diclofenolindofenol.


4.-Colocar la orina del paso 2 en una bureta, y añadirla lentamente, gota a gota al vaso de precipitados que contiene un colorante, hasta que el color desaparezca.

5.- Anotar los mililitros de orina requeridos para reducir el colorante.

6.- Efectuar los cálculos de la vitamina c que se haya presente en la cantidad de orina recolectada. Considere que el colorante se haya preparado a una concentración de 80mg/100 ml y que la cantidad de vitamina C es directamente proporcional a la cantidad de colorante reducido.

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 10 LIPIDOS

A REALIZARSE SEMANA 20 AL 24 OCTUBRE 2014

AVISO IMPORTANTE: LA ACADEMIA ESTA ANALIZANDO QUE PRÁCTICA SE REALIZARA PARA ESTE TEMA.  A MAS TARDAR EL 15 DE OCTUBRE 2014 SE COLOCARA AQUI LA INFORMACIÓN





PRACTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No 9 OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO

A REALIZARSE LA SEMANA 13 A 17 OCTUBRE 2014



OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO

OBJETIVO


El alumno demostrara la oxidación mitocondrial del succinato, utilizando un aceptor artificial de electrones, la cantidad del cual será determinada por espectrofotometría.


INFORMACION GENERAL

Los animales superiores son heterótrofos, es decir, no pueden sintetizar su propia energía (como lo hacen las plantas en la fotosíntesis), sino que deben ingerir esa energía en los alimentos que consumen, y posteriormente extraer parte de la misma mediante una compleja serie de reacciones bioquímicas.


La principal fuente de energía para los animales y el hombre son los carbohidratos, el metabolismo energético de estos compuestos incluye reacciones como la glucólisis, ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Dependiendo de si las condiciones microambientales son aerobias (con presencia de oxigeno), o anaerobias (en ausencia de oxigeno), las reacciones proseguirán por una vía, o bien, se detendrán a cierto nivel.

La mitocondria, es un pequeño organelo celular en donde se llevan a cabo las reacciones que requieren la presencia de oxigeno. En la mitocondria se hallan numerosas enzimas que hacen posible la oxidación de los metabolitos del ciclo de Krebs.

La oxidación puede implicar: ganancia de oxigeno, perdida de hidrogeno, o mas específicamente, perdida de electrones.

La producción de energía por parte de la mitocondria, implica el transporte de electrones a lo largo de una cadena de reacciones y de varias maneras, una de ellas, es la colorimétrica, usando un aceptor artificial de electrones, el cual cambia de color cuando capta dichos electrones.


Para medirá con exactitud el grado en el cual se produce el cambio de color, se usara un aparato muy común en el laboratorio de bioquímica, el espectrofotómetro.

Sin entrar en muchos detalles, este aparato nos mide la cantidad de luz que atraviesa un medio coloreado (trasmitancia), o bien, nos puede medir la cantidad de luz que es retenida o absorbida por ese medio coloreado (absorbancia).

A mayor cantidad de substancias coloreadas tenga una muestra, mayor cantidad de luz será capaz de absorber, pero ello también dependerá del espesor de la cubeta (los tubos de cuarzo donde se colocan las muestras dentro del aparato).

Para el caso de la práctica, se usará como aceptor artificial de electrones al ferrocianuro (se usará ferrocianuro de potasio).

Esta substancia es de color amarillo, y a medida que va aceptando electrones, va haciéndose cada vez más pálida. A mayor cantidad de electrones aceptados, más pálida se vulva la solución, esta disminución de color se puede mediar con gran exactitud usando el espectrofotómetro.

MATERIALES REACTIVO

4 tubos de ensayo 120 x 10mm
1 gradilla
3 pipetas de 1ml
2 pipetas de 0.1ml

2 vasos p.p. 250ml
1 termómetro

1 baño Maria
1 mortero y mano
1 centrifuga con tubos

1 trozo de gasa
1 espectrofotómetro con cubetas
1 licuadora





Buffer de fosfatos pH 7.4 0.1M

Succinato en buffer 0.01M

Malonato en buffer 0.01M

Cianuro de potasio

Ferrocianuro de potasio 0.01M

Ácido tricloroacético al 10%


hielo picado


MATERIAL BIOLÓGICO
Trozo de corazón de res (fresco).


DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.

1. Pese 10 gramos de corazón de res fresco (puede ser de otra especie).

2. Pique finamente el trozo de corazón, añada 190ml de buffer de fosfatos bien frío.

3. Coloque en un vaso licuador y licue por 1 minuto.

4. Filtre a través de gasa fina y recoja el filtrado en un vaso de precipitados.

5. Coloque en baño Maria de hielo el vaso de precipitados que contiene el filtrado (homogenizado).

6. Numere 3 tubos de ensayo y proceda como muestra el esquema:



                                                          Tubo 1              Tubo 2                         Tubo 3



Buffer de fosfatos                             3ml                      2ml                              1.9ml

Succinato en buffer                                                       1ml                              1ml

Malonato en buffer                                                                                          0.1ml

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Homogenizado del paso No 5           1 ml                      1 ml                             1 ml

NOTA: Checar que esté bien mezclado.

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Cianuro de potasio                          1 gota                   1 gota                           1 gota

7. Colocar los tubos en un baño Maria a 37°C por 5 minutos.


8. Añadir a cada tubo 1ml de ferrocianuro de potasio. Mezcle bien, anotar el tiempo al que se hizo la adición.

9. Diez minutos después agregue a cada tubo 5ml de ácido tricloroacético. Mezcle bien.

10. Centrifugue cada tubo por 5 minutos a 2,000 r.p.m.

11. Obtenga el sobrenadante de cada tubo y tome la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 420nm. NOTA: UTILICE AGUA DESTILADA COMO BLANCO PARA CALIBRAR EL APARATO.


12. Calcule el numero de micromoles de ferrocianuro que quedan en cada tubo, para ello considere lo siguiente:

a) La Extinción molar (E) del ión ferrocianuro es de 1 X 10 3 litros mol -1 cm -1 a 420nm.

b) El volumen total en cada tubo, luego de la adición del ácido tricloroacético es de 10ml.

c) La longitud del rayo de luz que atraviesa la cubeta es de 1-1.2 cm. (Consulte a su instructor para el caso de las cubetas que usted está usando)


FORMULA A EMPLEAR PARA LOS CALCULOS

C = A
      EB


C = Concentración

A = Absorbancia medida en el espectrofotómetro

E = Extinción molar (1 X 10 3 mol -1 cm -1)

B = Espesor de la cubeta (cms)

Micromoles de Fe (CN) 3 al final de la reacción usados por el sistema



Tubo 1



Tubo 2



Tubo 3



12. Resultados esperados



PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIO No. 8 PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

A REALIZARSE DURANTE LA SEMANA 6 A 10 OCTUBRE 2014



PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS




OBJETIVO



El alumno aplicara algunas pruebas químicas, para detectar la presencia de carbohidratos que se hallen presentes sea como mono, oligo, o polisacáridos.



INFORMACION GENERAL



Los carbohidratos, químicamente son derivados aldehídicos o cetonicos de alcoholes polihidroxilados.

De acuerdo con esta definición tenemos dos grandes familias de carbohidratos, las ALDOSAS (contienen en su molécula al radical aldehído) CHO

Y las CETOSAS (contienen en su molécula al radical ceto) C=O


A los carbohidratos, también se les da el nombre de hidratos de carbono, glúcidos y azucares.

Se hallan ampliamente distribuidos en la naturaleza, tanto en vegetales como en animales, en los primeros realiza fundamentalmente una función plástica (forman pared de los tejidos de la planta), y en menor grado una función de reserva de energía (como el almidón de las plantas)

En los animales, los carbohidratos constituyen la fuente primaria para la obtención de energía, esta es su principal función; también se les encuentra formando parte de numerosas moléculas, y son a la vez una fuente de reserva de energía a corto plazo (en forma de deposito de glucógeno hepático y muscular).


De acuerdo con el numero de moléculas de que constan, los carbohidratos se pueden clasificar en :


a) Monosacáridos.---formados por solo una unidad (monómeros), ejemplo la glucosa

b) Oligosacáridos. ------ Formados por dos o hasta 8 unidades. Reciben el nombre entonces de di, tri, tetrasacáridos, etc.

Ejemplo: Lactosa (el azúcar de la leche), formada por la unión de glucosa + galactosa (es un disacárido).

Una molécula de un carbohidrato, se une a otro carbohidrato por medio de un enlace llamado glucosidico.

c) Polisacáridos. --- formados por mas de 8 unidades o monómeros, por ejemplo: el almidón (es una cadena formada solo por glucosa, unidas a otras moléculas de glucosa, por enlaces llamados glucosidicos).


MATERIALES REACTIVOS

18 Tubos de ensayo 120 x 10 mm.

1 gradilla

1 vaso p.p 250 ml

1 mechero

1 tripie

1 tela de asbesto

5 pipetas 5 ml

6 pipetas 1 ml

1 pinza p/ tubo de ensayo Agua destilada

H2SO4 conc.

HCL conc

HNO3 conc

Sol. De lugol

Sol. De cromato de potasio 5%

Ácido fosforico 85%

Sol. Al 1% de glucosa, fructosa y almidón.

Sobres con 30 mg de glucosa, sacarosa, lactosa, NaCl.

Sol. Alcohólica timol 5%

Alfa naftol sol. Alcohólica al 2%



DESARROLLO DE LS EXPERIMENTOS



4.1- Prueba del timol para carbohidratos.



Disponer de tres tubos de ensayo, numerarlos y proceder como muestra el siguiente esquema.

                                                Tubo 1                        Tubo 2                           Tubo 3

Glucosa 30 mg                           X

Lactosa 30 mg                                                                  X

NaCl 30 mg                                                                                                            X

Agua destilada                            2 ml                               2 ml                          2 ml

Sol. Alcohólica timol 5%         3 gotas                              3 gotas                      3 gotas



AGITAR LA MEZCLA DE CADA TUBO



INCLINAR LOS TUBOS, INTRODUCIR H2SO4 concentrado. Con una pipeta, de tal forma que 0.5 ml de ácido queden bajo la solución acuosa.

Hacer este pasó para cada uno de los tres tubos. SIN AGITAR.




4.2 – Prueba de ácido nicrómico para carbohidratos


Disponer de tres tubo de ensayo, numerarlos, y proceder como se muestra en el siguiente esquema.



                                                       Tubo 1                  Tubo 2                    Tubo 3

Glucosa 30 mg                                  X

Almidón 30 mg                                                                  X

NaCl 30 mg                                                                                                         X

Agua destilada                                 3 ml                        3 ml                              3 ml

HNO3 conc.                                  3 ml                        3 ml                               3 ml

Sol. Cromato de potasio al 5%      5 gotas ´                5 gotas                           5 gotas

AGITAR Y DEJAR EN REPOSO POR DOS MINUTOS. OBSERVAR COLOR




4.3- Prueba del ácido fosfórico para cetosacáridos


Marque dos tubos de ensayo y proceda según el esquema.

                                                               Tubo 1                   Tubo 2

Sacarosa 30mg                                           X

Glucosa 30mg                                                                             X

Ac. Fosforico al 85%                                 1ml                          1ml


AGITAR LA MEZCLA, COLOCAR EN BAÑO MARIA POR 1 MIN, RETIRAR Y OBSERVAR COLOR DESARROLLADO.






4.4-Prueba de Molisch.


Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.


                                                Tubo 1                         Tubo 2                            Tubo 3

Sol. Glucosa al 1%                      2 ml

Sol. Fructosa al 1%                                                        2 ml

Agua destilada                                                                                                         2 ml

Reactivo de Molisch                  5 gotas                          5 gotas                             5 gotas

MEZCLAR, INCLINAR CADA TUBO Y AÑADIR CON CUIDADO A CADA TUBO H2SO4.
                                                 2ML                                2 ML                                 2 ML






4.5 Prueba de lugol para almidón y glucógeno

Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.

                                                     Tubo 1                  Tubo 2                     Tubo 3

Sol. Glucosa 1%                              2 ml

Sol. Fructosa 1%                                                        2 ml

Sol. Almidón 1%                                                                                           2 ml

HCl concentrado                             3 gotas                  3 gotas                      3 gotas
                    
Lugol                                               1 gota                    1 gota                       1 gota

MEZCLAR



PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 6 Y 7 ENZIMAS:

A REALIZARSE SEMANA 29 SEPTIEMBRE AL 3 OCTUBRE 2014 

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 6




ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL



OBJETIVO



El alumno demostrara la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.



INFORMACION GENERAL



Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.

La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.



La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón.

La amilasa actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).



La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.



En el caso del hombre, la producción de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.

La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.

Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.



FUNDAMENTO DE LA PRACTICA



Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.





MATERIALES REACTIVOS

2 pipetas de 5 ml Solución de lugol

2 pipetas de 1 ml Saliva

2 vasos p.p. 100 ml Sol. Almidón al 2%

2 vasos p.p. 250 ml HCL 0.25 N

6 tubos de ensayo 13 x 100 mm NaOH 0.25 N

1 mechero

1 tripié

1 tela de asbesto

1 gradilla

1 termómetro

1 embudo

1 trozo de gasa

Cubos de hielo

4 tiras indicador de pH universal



DESARROLLO DEL EXPERIMENTO



1. 1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva.



2. 2. Prepare un baño María a una temperatura de 40 grados centígrados



3. 3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:



                                       Tubo 1               Tubo 2                Tubo 3              Tubo 4

Sol. Almidón                    2ml                    2 ml                      2 ml                     2 ml

Lugol                                3 gotas              3 gotas                  3 gotas                3 gotas

Sol. HCL                          1 ml

Sol. NaOH                                                 1 ml

Saliva                                1 ml                   1 ml                     1 ml                        1 ml



4. 4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos



5. 5. Coloque los tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitado con hielo picado


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PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 7



ENZIMAS: DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA


OBJETIVO


El alumno observará y demostrará la actividad de la catalasa presente e los eritrocitos. Observará a la vez el efecto que tiene sobre la acción enzimática la adición de substancias inhibidoras y la desnaturalización enzimática por la acción del calor.



INFORMACION GENERAL



La catalasa es una enzima de naturaleza compleja que se halla distribuida en numerosas tejidos y es particularmente abundante en los eritrocitos.

Es una de las enzimas más activas que existen en el organismo.

La función que realiza la catalasa es muy importante, ya que protege a las células de la peroxidación, es decir destruye el peróxido de hidrógeno que se forma en las células con motivo de varias reacciones de oxidación.



La reacción que cataliza la enzima es la siguiente:



2 H202---------------> H20 + 02


Es decir, la enzima transforma 2 moléculas de peróxido de hidrógeno (H202), el cual es tóxico y cáustico para la célula, hasta 2 moléculas de Agua (H20), y una de oxígeno molecular (02). 1mg de enzima pura libera cerca de 3,000 litros de oxígeno por hora.



Como cualquier otro enzima, para que efectúe su acción requiere de un pH y temperatura apropiados. La presencia de substancias inhibidoras puede traer como consecuencia la disminución de la actividad o la inactivación total de la acción enzimática.


MATERIALES REACTIVOS

1Gradilla

6 tubos de ensayo grandes

2 pipetas ml

1 mechero

1 tripie

1 tela asbesto

2 vasos p.p 250 ml

1 pinza p/tubo de ensayo

1 termómetro

2 pipetas 1 ml

2 frascos goteros

1 jeringa desechable de 3 ml Peróxido de hidrógeno al 5 %

Cianuro de Sodio al 8%

Nitrato de plomo al 5%



MATERIALES BIOLOGICOS

Sangre diluida 1 : 50

DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.


PRECAUCION: ¡CUIDADO! EL CIANURO DE SODIO Y EL NITRATO DE PLOMO SON MUY VENENOSOS, NO LOS PIPETEE. USE UN GOTERO.



1.-Tome 4 tubos de ensayo, numérelos.



2.-Al tubo rotulado como No 1 añádale 3ml de sangre diluida, colocarlo en baño María durante 10 minutos, enfriar luego con agua corriente, hasta que alcance la temperatura ambiente.



3.-Proceda como en el esquema que se muestra:



                                                Tubo 1              Tubo 2         Tubo 3           Tubo 4
Peróxido de hidrógeno             2ml                    2ml                 2ml                 2ml

Cianuro de Sodio                                                                    12 gotas

Nitrato de plomo                                                                                         12 gotas
________________________________________________________________________
Nota: antes de proceder a añadir la sangre a los tubos 2,3 y 4, considere que deberá hacerlo LENTAMENTE, ESCURRIENDO POR LAS PAREDES DEL TUBO, SIN AGITAR NI MEZCLAR

Sangre diluida                                                        3ml              3 ml               3ml



4.-Coloque los tubos en baño María a 37 ° C durante 5 minutos.

Observe los cambios y resultados que se producen.




Práctica de Bioquímica para veterinaria No.5 PROTEÍNAS: AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE

A REALIZARSE SEMANA 22 AL 26 SEPTIEMBRE 2014

Práctica de Bioquímica para veterinaria No.5



PROTEÍNAS: AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE



Objetivo

El alumno aislará la proteína caseína de la leche de vaca, aprovechando el punto isoeléctrico de dicha proteína.



Información general

Las proteínas son biopolímeros de alto peso molecular, formados por la unión de aminoácidos (unidos ellos a través de un enlace llamado peptídico). Por lo general para que una molécula reciba el nombre de proteína debe tener como mínimo 50 aminoácidos y un peso mínimo de 5,000 Daltones.



Las proteínas realizan funciones muy importantes dentro del cuerpo de los animales una de ellas es la función plástica, es decir forman parte de los órganos o tejidos presentes en el cuerpo, por ejemplo los músculos contienen actina y miosina, el pelo y la piel contienen queratina, la sangre contiene hemoglobina todas estas son proteínas.



Todas las enzimas que hacen posibles las reacciones que ocurren dentro d e las células, así como los anticuerpos que defienden al organismo contra infecciones son también proteínas, de aquí se desprende que sin la presencia de las proteínas en los individuos, la vida no seria posible.



Debido a que se encuentran ampliamente distribuidas en el cuerpo y los líquidos corporales, es posible aislar las proteínas de estos últimos; para el caso de la práctica se pretende aislar la caseína, la cual esta formada por la mezcla de varias proteínas que contienen fósforo y se haya presente como componente de la leche en una cantidad de aproximadamente 35 gramos/litro.



Para separar la caseína del resto de los componentes de la leche se va a recurrir a una propiedad que tienen las proteínas de poseer un punto isoeléctrico. El punto isoeléctrico se refiere al pH en el cual las proteínas son menos solubles, en base a esa menor solubilidad la caseína puede luego precipitarse, se usará alcohol debido a la caseína es insoluble en él y además el alcohol remueve la grasa de la leche.



Materiales Reactivos



Gasa Amortiguador de acetato pH4.6 0.2M

Embudo Buchner Etanol 95%

Papel filtro Éter

Vaso pp. 500 ml agua destilada

Vaso pp. 250 ml HCl 0.1 N

Varilla vidrio NaOH 0.1 N

Potenciómetro mezcla etanol: éter (1:1)

Caja Petri leche de vaca

Probeta 100 ml

Termómetro

2 pipetas 1ml

Bomba de vacío

Placa de calefacción

Manguera hule látex

matraz Kitasato 500 ml



Desarrollo del experimento



1.-En un vaso de precipitados de 500 ml colocar 100 ml de leche de vaca y calentarla en la placa de calentamiento hasta que alcance los 40°C.



2.-Al mismo tiempo colocar en un vaso de precipitados 100 ml del amortiguador de acetato en la placa de calentamiento y calentar hasta que alcance los 40°C.



3.-Añadir LENTAMENTE Y AGITANDO la solución de amortiguador de acetato al vaso que contiene la leche.



4.-Medir el pH de la mezcla usando un potenciómetro, la lectura debe ser aproximadamente de 4.8, de no ser así corregir el pH añadiendo unas gotas de HCl 0.1 N para acidificar, o usar gotas de NaOH 0.1N para alcalinizar según sea el caso requerido.



5.-Enfriar la suspensión a temperatura ambiente y dejar en reposo durante 5 minutos



6.-Colocar la gasa en el embudo Buchner, y el embudo en el matraz Kitasato, el cual a su vez se conecta a la bomba de vacío.



7.-Filtrar la suspensión del paso 5 a través del embudo Buchner.



8.-Lavar el precipitado que queda en el embudo 3 veces usando 20 ml de agua cada vez



9.-Pasar el precipitado a un vaso que contenga 30 ml de etanol al 95%



10.-Colocar un papel filtro en el embudo Buchner y hacer pasar por él la suspensión del paso 9.



11.-Lavar el precipitado del embudo Buchner usando 50 ml de una mezcla de etanol-éter.



12.-Lavar el precipitado con 50 ml de éter y secar manteniendo el vacío.



13.-Remover el polvo formado y colocarlo en el fondo de una caja de Petri (LA CUAL PESO ANTES), con el fin de permitir que se evaporen los residuos de éter.



14.-Pesar la caja de Petri con la caseína y calcular el porcentaje en que se pudo recuperar la proteína.