martes, 14 de octubre de 2014

PRÁCTICA DE BIOQUÍMICA NO. 12 VITAMINAS

A REALIZARSE SEMANA 10 AL 14 NOVIEMBRE DE 2014



PRÁCTICA NO. 12 VITAMINAS: DETERMINACIÓN DE LA VITAMINA C EN LA ORINA


OBJETIVO:

El alumno cuantificara loa cantidad de ácido ascórbico (vitamina c) excretada en la orina, por el método de Tillmans.

INFORMACION GENERAL

La vitamina c o ácido ascórbico, es una vitamina hidrosoluble, ampliamente distribuida en los vegetales verdes, y en las frutas sobre todo en las llamadas cítricos como limón, naranja, etc.). Es altamente soluble en agua, pero muy inestable. Puede formar cristales incoloros, con un punto de fusión de 190-192 °C.

La vitamina C es sintetizada por todos los animales domésticos, excepto por el cobayo. El hombre al igual que el cobayo, carece de la enzima clave para efectuar la síntesis de la vitamina, (la 1-L gunolactona oxidasa), de aquí que en la dieta que consume el hombre, deba estar presente la vitamina para evitar deficiencias.

La deficiencia de vitamina C en el hombre, produce la enfermedad conocida como escorbuto, la cual era bastante común hace algunos años (sobre todo en los marineros), cuando se desconocían las causas de esta enfermedad. El escorbuto se manifiesta por lesiones en las encías principalmente, se produce un agrietamiento de estas, debido a que la vitamina c es necesaria para la formación de colágeno.

La vitamina c aumenta la capacidad respuesta del sistema inmune de los animales.

Otras funciones que desempeña la vitamina, es la de actuar como reductor (en esta propiedad se basa el método para detectarla).

En el caso del hombre, la vitamina c como ya se mencionó, no se sintetiza, por lo tanto debe ingerirse con los alimentos que consumimos. En una dieta típica, existe mayor cantidad de vitamina que la que requerimos, y debido a que esta vitamina no puede almacenarse en el cuerpo, se elimina en la orina. La ingestión normal diaria para un adulto oscilara entre 20-80 mg/día, de los cuales un 50%se elimina en un periodo de 24 horas por la orina. En casos de deficiencia de vitamina c, o en infecciones severas, la vitamina pudiera o detectarse en orina.

FUNDAMENTO PARA LA DETERMINACION DE VITAMINA C

El ácido ascórbico es oxidado por el colorante 2,6 diclorofenolindofenol, a su vez este

colorante es reducido por el ácido ascórbico a un compuesto incoloro, pudiendo entonces calcular la cantidad de colorante reducido, la cual es proporcional a la cantidad de vitamina c presente en la orina.

Debido a que en la orina existen otras substancias que pudieran reducir al colorante, se acidificara la orina para que, si están presentes estas substancias, reaccionan muy lentamente con el colorante.


MATERIALES

Un vaso de p.p. 250ml

2 pipetas de 10 ml

2 pipetas 1 ml

1 vaso p.p 100 ml

1 embudo

1 agitador

1 bureta 25 ml

1 soporte para bureta

1 pinza para bureta

REACTIVOS

Acido acetico al 50 %

Colorante 2,6 diclofenol indofenol (80 mg/100 ml)


MATERIAL BIOLOGICO

Orina recién evacuada


DESARROLLO DEL EXPERIMENTO

1.- Medir en una probeta el total de orina excretada. Anotar dicho volumen.

2.- Pasar la orina a un vaso de precipitados, y añadirle una gota de ácido acético.


3.- En otro vaso de precipitados de 100ml añadir 0.5 ml de colorante 2,6 diclofenolindofenol.


4.-Colocar la orina del paso 2 en una bureta, y añadirla lentamente, gota a gota al vaso de precipitados que contiene un colorante, hasta que el color desaparezca.

5.- Anotar los mililitros de orina requeridos para reducir el colorante.

6.- Efectuar los cálculos de la vitamina c que se haya presente en la cantidad de orina recolectada. Considere que el colorante se haya preparado a una concentración de 80mg/100 ml y que la cantidad de vitamina C es directamente proporcional a la cantidad de colorante reducido.

martes, 16 de agosto de 2011

AVISO MUY IMPORTANTE

BIENVENIDOS ALUMNOS Y MAESTROS AL BLOG DE LAS PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA CURSO AGOSTO 2014.

MAESTR@S TOMAR EN CUENTA QUE POR CAUSAS DE FUERZA MAYOR,  SE TUVO QUE REPROGRAMAR EL CALENDARIO ORIGINAL.

PONER ATENCIÓN A QUE EL NÚMERO QUE TIENE LA PRÁCTICA ASIGNADO REPRESENTA LA SECUENCIA EN QUE SE VA A REALIZAR, SE SEÑALA A LA VEZ LA FECHA EN QUE DEBE DE REALIZARSE LA PRÁCTICA.

EN  SEMANA DEL 13 AL 17 OCTUBRE NO  SE REALIZARÁN PRÁCTICAS, SUS MAESTROS DE LABORATORIO LA USARAN PARA RETROALIMENTACIÓN 

EL BLOG ESTA ACTUALIZADO AL 14 DE OCTUBRE DE  2014, CONTIENE  TODOS LOS CAMBIOS CONSENSUADOS Y APROBADOS POR LA ACADEMIA

PRACTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No 11 AC.NUCLEICOS

A REALIZARSE LA SEMANA 3 a 7 NOVIEMBRE 2014


PRACTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No. 12




ACIDOS NUCLEICOS: AISLAMIENTO DE ADN A PARTIR DE HEPATOCITOS



OBJETIVO:




El alumno aislara el ácido nucleico desoxiribonucleico (ADN) a partir de células hepáticas (hepatocitos) e identificara por pruebas colororimétricas algunos de sus componentes básicos.



INFORMACIÓN GENERAL:



Existen 2 tipos principales de ácidos nucleicos: El ADN ( ácido desoxiribonucleico) y el ARN (acido ribonucleico).Los ácidos nucleicos son biopolímeros sumamente importantes dentro de las células, su principal función es participar en la síntesis de proteínas, y además, participar en los fenómenos de reproducción celular, en cuanto a su estructura química, los ácidos nucleicos constan de la unión de numerosos nucleótidos, estos nucleótidos estan formados por una base nitrogenada que puede ser ; purica ( adenina o guanina) o bien pirimidinica (citosina, timina o uracilo), constan también de un azúcar pentosa (ribosona o desoxirribosa ), y además fósforo.



El ácido desoxiribonucleico o ADN para el caso de las células eucarióticas se encuentra principalmente dentro del núcleo, aunque una pequeña porción del mismo se encuentra dentro de las mitocondrias, el ADN tiene una estructura tridimensional de una doble hélice, en la cual las bases nitrogenadas se encuentran siempre apareadas Guanina con Citosina y Adenina con Timina, se estima que el genoma humano haploide contiene alrededor de 3,000 millones de pares de bases.



Materiales Reactivos

Trozo de Hígado

Cuchillo

Licuadora

Gasa

Embudo Buchner

Bomba de vacío

Vaso pp 250 ml (2)

Varilla de vidrio

Probeta 50 ml (2)

3 tubos ensayo 10x12 mm

Pipeta Pasteur

3 pipetas 1 ml

Centrífuga

Tubos de polirtileno50 ml para centrífuga

Palillo de madera (largo)

Hielo



Sal común

Solución detergente sulfato lauril sódico

Proteasa

Alcohol etílico

Äcido sulfúrico

Reactivo de Bial

Molibdato de amonio

Reactivo de Fiske-Subarow







Desarrollo del experimento



1.-Pesar 50 gramos de hígado, cortarlo en trozos pequeños, pasarlos a un vaso de licuadora y añadir 100 ml de agua destilada fría más 10 gramos de sal común.



2.-Licuar a máxima velocidad por aproximadamente 30 segundos



3.-Filtrar a través de una capa fina de gasa colocada sobre un embudo Buchner, usar bomba de succión en caso de que sea necesario



4.-Pasar el filtrado a un vaso de precipitados de 250 ml y añadir 25 ml de solución detergente.



5.-Mezclar por 3 minutos lentamente y con cuidado el filtrado y la solución detergente usando una varilla de vidrio, IMPORTANTE TRATAR DE NO HACER ESPUMA AL MEZCLAR



5.-Dejar reposar la mezcla durante mínimo 10 minutos



6.-Pasar la mezcla a un tubo de ensayo llenando solamente 1/3 del volumen del tubo de ensayo y añadir una pizca o pequeña cantidad de enzima proteasa, agitar el tubo suavemente. PRECAUCIÓN SI SE AGITA CON VIOLENCIA SE VA A ROMPER EL ADN, VA A SER DIFICIL VERLO



7.-Ladear el tubo de ensayo y lentamente y por las paredes del tubo ir virtiendo alcohol etílico frío en una cantidad igual al volumen del filtrado que ya hay en el tubo.

PRECAUCION, LA ADICIÓN DEL ALCOHOL SE HACE LENTAMENTE Y POR LAS PAREDES DEL TUBO.



8.-Dejar reposar la mezcla por 30 minutos mínimo



9.- Colectar el ADN usando un palillo largo de madera para extraerlo del tubo





Resultados esperados



Si el procedimiento fue llevado a cabo de manera apropiada tal y como se describe en la práctica , observaras que el ADN (en forma de una sustancia blanca filamentosa, de aspecto viscoso) se desprendió de la muestra y se eleva hasta la superficie de la capa de alcohol, desde donde puede ser recuperada usando el palillo.



HIDRÓLISIS DEL ADN E IDENTIFICACIÓN DE SUS COMPONENTES





A.- IDENTIFICACIÓN DEL AZUCAR PENTOSA



1. Tome 0.2 gr. Del precipitado obtenido, colocarlo en un tubo de ensayo y añadirle 2 ml. De H2SO4 13 N.



2. Hierva a la flama del mechero ( suavemente ), agitando , durante 10 min.



3. Retire con una pipeta pasteur una pequeña porción del hidrolizado



4. Coloque 6 gotas del hidrolizado en un tubo de ensayo pequeño



5. Añada 0.5 ml de reactivo de Bial y agite.





RESULTADOS ESPERADOS



La presencia de azúcar pentosa ( desoxiribosa), que contiene el ADN, se manifiesta por la aparición de un color verde azuloso, debido a la reacción del furfural (producido al usar H2SO4 sobre el carbohidrato), mas el orcinol que contiene el reactivo de Bial.



B.- IDENTIFICACIÓN DE FOSFATO



1. Tome con una pipeta pasteur aprox. 1 ml del hidrolizado y pasarlos a un tubo de ensayo



2. Añada 0.5 ml. H2SO4 10 N y 1 ml. De molibdato de amonio al 2.5%



3. Añada 1 ml. De reactivo de fiske-subarow y dejar reposar 10 min.











PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 10 LIPIDOS

A REALIZARSE SEMANA 27 AL 31 OCTUBRE 2014


PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 10 LIPIDOS



El término lípido se aplica a una gran variedad de compuestos químicamente muy heterogéneos, que comparten una propiedad física común, son insolubles en agua, pero son solubles en solventes orgánicos como éter, cloroformo, benceno etcétera. Los lípidos son componentes muy importantes en las células sobre todo como elementos estructurales en la composición de las membranas celulares ejemplo : fosfolípidos, pero también como compuestos metabólicos ejemplos: colesterol, vitamina A. Los lípidos se clasifican  en tres grandes grupos :
Lípidos simples.-aquellos que solo están formados por ésteres de alcohol y ácidos grasos
Lípidos compuestos.-aquellos que además del alcohol y ácido graso, poseen otro componente extra por ejemplo carbohidratos (se llamarían glucolípidos) fosfato (se llamarían fosfolípídos)
Lípidos derivados.- son aquellos ligeramente emparentados con un hidrocarburo llamado isopreno, por ello se les designa también como isoprenoides, en esta categoría entran sustancias como las vitaminas liposolubles (A,D, E, K) el colesterol y sus derivados, así como las hormonas esteroides.

Materiales

Aceite vegetal  15 ml
9 Tubos de ensayo 15 X 10 mm
1 Gradilla para tubos ensayo
1 Pinzas para tubo ensayo
1 Vaso precipitados 250 ml
1 Vaso precipitados 500ml
1 Mechero
1 Tela asbesto
1 Tripié
1 Chispa
7 pipetas 5 ml
1 probeta 25 ml
1 varilla vidrio aprox. 15 cms., longitud 3 mm diámetro
5 pipetas 2 ml

Reactivos

Hidróxido de sodio 5 gramos
Alcohol etílico    25 ml
Aceite vegetal  15 ml
Colesterol 100 miligramos
Acido sulfúrico concentrado  4 ml
Anhidrido acético 1 ml
Eter  40 ml
Cloroformo 6 ml
Benceno 6 ml
Cloruro calcio 0.5 gramos

Experimento uno.- Solubilidad de lípidos



1.-Prepare 3 tubos de ensayo rotulándolos y añadiendo las substancias según la siguiente tabla
Tubo
Aceite vegetal
Agua
Cloroformo
Benceno
1
2 ml
5 ml


2
2 ml

5 ml

3
2ml


5 ml
Coloque un tapón en cada tubo, y agite vigorosamente cada tubo para mezclar el contenido.

Deje reposar los tubos en una gradilla durante 3 minutos , observe y anote sus observaciones para cada tubo
¿Se solubilizó el aceite en todos los tubos o solo en alguno o algunos?


Experimento dos.-Saponificación de lípidos

1.-Coloque en un vaso de precipitados de 250 ml, 5 ml de aceite vegetal
2.-Agregue 15 ml de solución alcohólica de hidróxido de sodio (NaOH)
3.-En un vaso de precipitados de 500 ml coloque 100 ml de agua, coloque el vaso en un soporte y ponga el vaso a la flama de un mechero hasta que el agua hierva.
4.-Cuando el agua este hirviendo introduzca  USANDO PINZAS el vaso de precipitados de 250 ml dentro del  vaso que contiene el agua en ebullición.
5.-Agite ocasionalmente con una varilla de vidrio el contenido del vaso de 250 ml hasta que se forme una masa semisólida
6.-Con la varilla de vidrio transfiera una pequeña porción de la masa de vaso de precipitados a un tubo de ensayo.
7.-Agregue 5 ml de agua al tubo de ensayo y agite vigorosamente. Observe que ocurre y anote sus observaciones
8.-En un tubo de ensayo diferente con la varilla de vidrio transfiera una pequeña porción de la masa del vaso de precipitados
9.- Agregue 5 ml de agua al tubo de ensayo NO LO AGITE AÚN.  Añada 1 ml de cloruro de calcio al tubo de ensayo y agite vigorosamente. Observe que ocurre y anote sus observaciones

Experimento tres.-Identificación del colesterol

a.-Prueba de Salkowski.
1.-Coloque en un tubo de ensayo 2 ml de una solución de colesterol medidos con una pipeta
2.- Con una pipeta Muy lentamente y con cuidado. NO LO ASPIRE CON BOCA USE UN BULBO añada 2 ml de ácido sulfúrico concentrado al tubo de ensayo.
Observe y anote el color obtenido.

b.-Prueba de Liebermann-Burchard

1.-Coloque en un tubo de ensayo 2 ml de una solución de colesterol medidos con una pipeta
2.-Añada con cuidado 10 gotas de anhídrido acético.
3.-Añada con cuidado 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
4.-Tape el tubo y agite muy suavemente para mezclar
Observe y anote el color obtenido.

Cuestionario

1.-Cuál es la razón por la que los lípidos son solubles en solventes apolares
2.-Que significa el término apolar aplicado a una molécula de lípido
3.-En el caso de los lípidos que es una molécula anfipática
4.-Defina lo que es la saponificación
5.-Explique porque en el caso del tubo del paso 9 del experimento de saponificación no se forma espuma
6.-Explique que cambios químicos (asociados a los cambios de color)  se producen en la molécula del colesterol en los casos de la reacción de Salkowski y de Lieberman-Burchard






PRACTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No 9 OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO

A REALIZARSE LA SEMANA 20 A 24 DE OCTUBRE 2014



OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO

OBJETIVO


El alumno demostrara la oxidación mitocondrial del succinato, utilizando un aceptor artificial de electrones, la cantidad del cual será determinada por espectrofotometría.


INFORMACION GENERAL

Los animales superiores son heterótrofos, es decir, no pueden sintetizar su propia energía (como lo hacen las plantas en la fotosíntesis), sino que deben ingerir esa energía en los alimentos que consumen, y posteriormente extraer parte de la misma mediante una compleja serie de reacciones bioquímicas.


La principal fuente de energía para los animales y el hombre son los carbohidratos, el metabolismo energético de estos compuestos incluye reacciones como la glucólisis, ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Dependiendo de si las condiciones microambientales son aerobias (con presencia de oxigeno), o anaerobias (en ausencia de oxigeno), las reacciones proseguirán por una vía, o bien, se detendrán a cierto nivel.

La mitocondria, es un pequeño organelo celular en donde se llevan a cabo las reacciones que requieren la presencia de oxigeno. En la mitocondria se hallan numerosas enzimas que hacen posible la oxidación de los metabolitos del ciclo de Krebs.

La oxidación puede implicar: ganancia de oxigeno, perdida de hidrogeno, o mas específicamente, perdida de electrones.

La producción de energía por parte de la mitocondria, implica el transporte de electrones a lo largo de una cadena de reacciones y de varias maneras, una de ellas, es la colorimétrica, usando un aceptor artificial de electrones, el cual cambia de color cuando capta dichos electrones.


Para medirá con exactitud el grado en el cual se produce el cambio de color, se usara un aparato muy común en el laboratorio de bioquímica, el espectrofotómetro.

Sin entrar en muchos detalles, este aparato nos mide la cantidad de luz que atraviesa un medio coloreado (trasmitancia), o bien, nos puede medir la cantidad de luz que es retenida o absorbida por ese medio coloreado (absorbancia).

A mayor cantidad de substancias coloreadas tenga una muestra, mayor cantidad de luz será capaz de absorber, pero ello también dependerá del espesor de la cubeta (los tubos de cuarzo donde se colocan las muestras dentro del aparato).

Para el caso de la práctica, se usará como aceptor artificial de electrones al ferrocianuro (se usará ferrocianuro de potasio).

Esta substancia es de color amarillo, y a medida que va aceptando electrones, va haciéndose cada vez más pálida. A mayor cantidad de electrones aceptados, más pálida se vulva la solución, esta disminución de color se puede mediar con gran exactitud usando el espectrofotómetro.

MATERIALES REACTIVO

4 tubos de ensayo 120 x 10mm
1 gradilla
3 pipetas de 1ml
2 pipetas de 0.1ml

2 vasos p.p. 250ml
1 termómetro

1 baño Maria
1 mortero y mano
1 centrifuga con tubos

1 trozo de gasa
1 espectrofotómetro con cubetas
1 licuadora





Buffer de fosfatos pH 7.4 0.1M

Succinato en buffer 0.01M

Malonato en buffer 0.01M

Cianuro de potasio

Ferrocianuro de potasio 0.01M

Ácido tricloroacético al 10%


hielo picado


MATERIAL BIOLÓGICO
Trozo de corazón de res (fresco).


DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.

1. Pese 10 gramos de corazón de res fresco (puede ser de otra especie).

2. Pique finamente el trozo de corazón, añada 190ml de buffer de fosfatos bien frío.

3. Coloque en un vaso licuador y licue por 1 minuto.

4. Filtre a través de gasa fina y recoja el filtrado en un vaso de precipitados.

5. Coloque en baño Maria de hielo el vaso de precipitados que contiene el filtrado (homogenizado).

6. Numere 3 tubos de ensayo y proceda como muestra el esquema:



                                                          Tubo 1              Tubo 2                         Tubo 3



Buffer de fosfatos                             3ml                      2ml                              1.9ml

Succinato en buffer                                                       1ml                              1ml

Malonato en buffer                                                                                          0.1ml

___________________________________________________________________

Homogenizado del paso No 5           1 ml                      1 ml                             1 ml

NOTA: Checar que esté bien mezclado.

___________________________________________________________________
Cianuro de potasio                          1 gota                   1 gota                           1 gota

7. Colocar los tubos en un baño Maria a 37°C por 5 minutos.


8. Añadir a cada tubo 1ml de ferrocianuro de potasio. Mezcle bien, anotar el tiempo al que se hizo la adición.

9. Diez minutos después agregue a cada tubo 5ml de ácido tricloroacético. Mezcle bien.

10. Centrifugue cada tubo por 5 minutos a 2,000 r.p.m.

11. Obtenga el sobrenadante de cada tubo y tome la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 420nm. NOTA: UTILICE AGUA DESTILADA COMO BLANCO PARA CALIBRAR EL APARATO.


12. Calcule el numero de micromoles de ferrocianuro que quedan en cada tubo, para ello considere lo siguiente:

a) La Extinción molar (E) del ión ferrocianuro es de 1 X 10 3 litros mol -1 cm -1 a 420nm.

b) El volumen total en cada tubo, luego de la adición del ácido tricloroacético es de 10ml.

c) La longitud del rayo de luz que atraviesa la cubeta es de 1-1.2 cm. (Consulte a su instructor para el caso de las cubetas que usted está usando)


FORMULA A EMPLEAR PARA LOS CALCULOS

C = A
      EB


C = Concentración

A = Absorbancia medida en el espectrofotómetro

E = Extinción molar (1 X 10 3 mol -1 cm -1)

B = Espesor de la cubeta (cms)

Micromoles de Fe (CN) 3 al final de la reacción usados por el sistema



Tubo 1



Tubo 2



Tubo 3


** Oxidación Mitocondrial del Succinato**

1.- ¿Qué es el succinato?
2.- Menciona las ventajas y desventajas de utilizar al oxígeno para obtener energía en los organismos superiores
3.- ¿Porqué en ésta práctica se utiliza como mejor material biológico al corazón? Explica tu respuesta
4.- ¿Porqué se considera al ciclo de Krebs y a la cadena de transporte de electrones  como metabolismo aerobio?
5.- ¿Quién actúa como inhibidor de la succinato deshidrogenasa y de qué manera lo hace?
6.- Menciona los 3 factores que en el ciclo de krebs activan a la succinato deshidrogenasa





PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIO No. 8 PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

A REALIZARSE DURANTE LA SEMANA 6 A 10 OCTUBRE 2014



PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS




OBJETIVO



El alumno aplicara algunas pruebas químicas, para detectar la presencia de carbohidratos que se hallen presentes sea como mono, oligo, o polisacáridos.



INFORMACION GENERAL



Los carbohidratos, químicamente son derivados aldehídicos o cetonicos de alcoholes polihidroxilados.

De acuerdo con esta definición tenemos dos grandes familias de carbohidratos, las ALDOSAS (contienen en su molécula al radical aldehído) CHO

Y las CETOSAS (contienen en su molécula al radical ceto) C=O


A los carbohidratos, también se les da el nombre de hidratos de carbono, glúcidos y azucares.

Se hallan ampliamente distribuidos en la naturaleza, tanto en vegetales como en animales, en los primeros realiza fundamentalmente una función plástica (forman pared de los tejidos de la planta), y en menor grado una función de reserva de energía (como el almidón de las plantas)

En los animales, los carbohidratos constituyen la fuente primaria para la obtención de energía, esta es su principal función; también se les encuentra formando parte de numerosas moléculas, y son a la vez una fuente de reserva de energía a corto plazo (en forma de deposito de glucógeno hepático y muscular).


De acuerdo con el numero de moléculas de que constan, los carbohidratos se pueden clasificar en :


a) Monosacáridos.---formados por solo una unidad (monómeros), ejemplo la glucosa

b) Oligosacáridos. ------ Formados por dos o hasta 8 unidades. Reciben el nombre entonces de di, tri, tetrasacáridos, etc.

Ejemplo: Lactosa (el azúcar de la leche), formada por la unión de glucosa + galactosa (es un disacárido).

Una molécula de un carbohidrato, se une a otro carbohidrato por medio de un enlace llamado glucosidico.

c) Polisacáridos. --- formados por mas de 8 unidades o monómeros, por ejemplo: el almidón (es una cadena formada solo por glucosa, unidas a otras moléculas de glucosa, por enlaces llamados glucosidicos).


MATERIALES REACTIVOS

18 Tubos de ensayo 120 x 10 mm.

1 gradilla

1 vaso p.p 250 ml

1 mechero

1 tripie

1 tela de asbesto

5 pipetas 5 ml

6 pipetas 1 ml

1 pinza p/ tubo de ensayo Agua destilada

H2SO4 conc.

HCL conc

HNO3 conc

Sol. De lugol

Sol. De cromato de potasio 5%

Ácido fosforico 85%

Sol. Al 1% de glucosa, fructosa y almidón.

Sobres con 30 mg de glucosa, sacarosa, lactosa, NaCl.

Sol. Alcohólica timol 5%

Alfa naftol sol. Alcohólica al 2%



DESARROLLO DE LS EXPERIMENTOS



4.1- Prueba del timol para carbohidratos.



Disponer de tres tubos de ensayo, numerarlos y proceder como muestra el siguiente esquema.

                                                Tubo 1                        Tubo 2                           Tubo 3

Glucosa 30 mg                           X

Lactosa 30 mg                                                                  X

NaCl 30 mg                                                                                                            X

Agua destilada                            2 ml                               2 ml                          2 ml

Sol. Alcohólica timol 5%         3 gotas                              3 gotas                      3 gotas



AGITAR LA MEZCLA DE CADA TUBO



INCLINAR LOS TUBOS, INTRODUCIR H2SO4 concentrado. Con una pipeta, de tal forma que 0.5 ml de ácido queden bajo la solución acuosa.

Hacer este pasó para cada uno de los tres tubos. SIN AGITAR.




4.2 – Prueba de ácido nicrómico para carbohidratos


Disponer de tres tubo de ensayo, numerarlos, y proceder como se muestra en el siguiente esquema.



                                                       Tubo 1                  Tubo 2                    Tubo 3

Glucosa 30 mg                                  X

Almidón 30 mg                                                                  X

NaCl 30 mg                                                                                                         X

Agua destilada                                 3 ml                        3 ml                              3 ml

HNO3 conc.                                  3 ml                        3 ml                               3 ml

Sol. Cromato de potasio al 5%      5 gotas ´                5 gotas                           5 gotas

AGITAR Y DEJAR EN REPOSO POR DOS MINUTOS. OBSERVAR COLOR




4.3- Prueba del ácido fosfórico para cetosacáridos


Marque dos tubos de ensayo y proceda según el esquema.

                                                               Tubo 1                   Tubo 2

Sacarosa 30mg                                           X

Glucosa 30mg                                                                             X

Ac. Fosforico al 85%                                 1ml                          1ml


AGITAR LA MEZCLA, COLOCAR EN BAÑO MARIA POR 1 MIN, RETIRAR Y OBSERVAR COLOR DESARROLLADO.






4.4-Prueba de Molisch.


Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.


                                                Tubo 1                         Tubo 2                            Tubo 3

Sol. Glucosa al 1%                      2 ml

Sol. Fructosa al 1%                                                        2 ml

Agua destilada                                                                                                         2 ml

Reactivo de Molisch                  5 gotas                          5 gotas                             5 gotas

MEZCLAR, INCLINAR CADA TUBO Y AÑADIR CON CUIDADO A CADA TUBO H2SO4.
                                                 2ML                                2 ML                                 2 ML






4.5 Prueba de lugol para almidón y glucógeno

Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.

                                                     Tubo 1                  Tubo 2                     Tubo 3

Sol. Glucosa 1%                              2 ml

Sol. Fructosa 1%                                                        2 ml

Sol. Almidón 1%                                                                                           2 ml

HCl concentrado                             3 gotas                  3 gotas                      3 gotas
                    
Lugol                                               1 gota                    1 gota                       1 gota

MEZCLAR

** Pruebas Cualitativas para la identificación de carbohidratos**

1.- ¿Qué son los Azúcares reductores?
2.- ¿Cuáles son los componentes del Almidón?
3.- ¿Cuál es el fundamento del ensayo de Barfoed?
4.- ¿Cuál es la función de la glucoquinasa
5.- En la prueba de lugol solo se puede identificar al almidón ¿Porqué?¿En qué parte de su estructura actúa?
6.- Menciona 2 carbohidratos de función estructural
7.- ¿En qué consiste la prueba de Bial?
8.- ¿Cuál es el producto de la oxidación aeróbica de la glucosa?
9.- ¿Cuál es el mecanismo de transporte por el cual la glucosa ingresa a las células para su oxidación?

10.- La prueba de Molisch es una determinación colorimétrica, en donde se evidencia la presencia del carbohidrato con un color púrpura. ¿A qué se debe esto?

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 6 Y 7 ENZIMAS:

A REALIZARSE SEMANA 29 SEPTIEMBRE AL 3 OCTUBRE 2014 

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 6




ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL



OBJETIVO



El alumno demostrara la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.



INFORMACION GENERAL



Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.

La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.



La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón.

La amilasa actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).



La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.



En el caso del hombre, la producción de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.

La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.

Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.



FUNDAMENTO DE LA PRACTICA



Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.





MATERIALES REACTIVOS

2 pipetas de 5 ml Solución de lugol

2 pipetas de 1 ml Saliva

2 vasos p.p. 100 ml Sol. Almidón al 2%

2 vasos p.p. 250 ml HCL 0.25 N

6 tubos de ensayo 13 x 100 mm NaOH 0.25 N

1 mechero

1 tripié

1 tela de asbesto

1 gradilla

1 termómetro

1 embudo

1 trozo de gasa

Cubos de hielo

4 tiras indicador de pH universal



DESARROLLO DEL EXPERIMENTO



1. 1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva.



2. 2. Prepare un baño María a una temperatura de 40 grados centígrados



3. 3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:



                                       Tubo 1               Tubo 2                Tubo 3              Tubo 4

Sol. Almidón                    2ml                    2 ml                      2 ml                     2 ml

Lugol                                3 gotas              3 gotas                  3 gotas                3 gotas

Sol. HCL                          1 ml

Sol. NaOH                                                 1 ml

Saliva                                1 ml                   1 ml                     1 ml                        1 ml



4. 4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos



5. 5. Coloque los tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitado con hielo picado

** Hidrólisis del almidón por la Amilasa Salival **

1.- En función de  su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos. Investíguelos y explique la forma de acción que tiene cada uno de los grupos.
2.- En base a lo investigado anteriormente, ¿En que clasificación se encuentra la amilasa? ¿Por qué?
3.-  ¿Cuál es la diferencia entre la  S-amilasa y la P- amilasa?
4.- Investigue como se le llama a la sustancia sobre la cual actúa una enzima.
5.- ¿Cuáles son los 3 principales factores que afectan la actividad enzimática? Investigue a profundidad los cambios bioquímicos que ocurren en las enzimas por el efecto de estos 3 factores.
6.- ¿De qué tipo de iones es dependiente la amilasa para poder realizar su función?
7.- ¿Cuál es el pH óptimo de la amilasa?
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PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 7



ENZIMAS: DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA


OBJETIVO


El alumno observará y demostrará la actividad de la catalasa presente e los eritrocitos. Observará a la vez el efecto que tiene sobre la acción enzimática la adición de substancias inhibidoras y la desnaturalización enzimática por la acción del calor.



INFORMACION GENERAL



La catalasa es una enzima de naturaleza compleja que se halla distribuida en numerosas tejidos y es particularmente abundante en los eritrocitos.

Es una de las enzimas más activas que existen en el organismo.

La función que realiza la catalasa es muy importante, ya que protege a las células de la peroxidación, es decir destruye el peróxido de hidrógeno que se forma en las células con motivo de varias reacciones de oxidación.



La reacción que cataliza la enzima es la siguiente:



2 H202---------------> H20 + 02


Es decir, la enzima transforma 2 moléculas de peróxido de hidrógeno (H202), el cual es tóxico y cáustico para la célula, hasta 2 moléculas de Agua (H20), y una de oxígeno molecular (02). 1mg de enzima pura libera cerca de 3,000 litros de oxígeno por hora.



Como cualquier otro enzima, para que efectúe su acción requiere de un pH y temperatura apropiados. La presencia de substancias inhibidoras puede traer como consecuencia la disminución de la actividad o la inactivación total de la acción enzimática.


MATERIALES REACTIVOS

1Gradilla

6 tubos de ensayo grandes

2 pipetas ml

1 mechero

1 tripie

1 tela asbesto

2 vasos p.p 250 ml

1 pinza p/tubo de ensayo

1 termómetro

2 pipetas 1 ml

2 frascos goteros

1 jeringa desechable de 3 ml Peróxido de hidrógeno al 5 %

Cianuro de Sodio al 8%

Nitrato de plomo al 5%



MATERIALES BIOLOGICOS

Sangre diluida 1 : 50

DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.


PRECAUCION: ¡CUIDADO! EL CIANURO DE SODIO Y EL NITRATO DE PLOMO SON MUY VENENOSOS, NO LOS PIPETEE. USE UN GOTERO.



1.-Tome 4 tubos de ensayo, numérelos.



2.-Al tubo rotulado como No 1 añádale 3ml de sangre diluida, colocarlo en baño María durante 10 minutos, enfriar luego con agua corriente, hasta que alcance la temperatura ambiente.



3.-Proceda como en el esquema que se muestra:



                                                Tubo 1              Tubo 2         Tubo 3           Tubo 4
Peróxido de hidrógeno             2ml                    2ml                 2ml                 2ml

Cianuro de Sodio                                                                    12 gotas

Nitrato de plomo                                                                                         12 gotas
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Nota: antes de proceder a añadir la sangre a los tubos 2,3 y 4, considere que deberá hacerlo LENTAMENTE, ESCURRIENDO POR LAS PAREDES DEL TUBO, SIN AGITAR NI MEZCLAR

Sangre diluida                                                        3ml              3 ml               3ml



4.-Coloque los tubos en baño María a 37 ° C durante 5 minutos.

Observe los cambios y resultados que se producen.



**  Demostración de la actividad de la catalasa **

1.-Hay dos modelos sobre la forma en la que el sustrato se une al sitio activo de una enzima. Investíguelos y explique claramente como funcionan cada uno de ellos.

2.-  Hay algunas sustancias que pueden inhibir la acción enzimática, investigue los dos tipos de inhibidores enzimáticos  y cual es la forma de acción de cada uno de ellos.

3.- ¿En que organelos celulares se encuentra la catalasa?

4.- Si los eritrocitos carecen de orgánulos, ¿En qué parte actúa la catalasa?

5.- El cianuro de sodio actúa como  inhibidor de la catalasa, si el cianuro entrara a la circulación sanguínea luego a los tejidos y finalmente a las células....  ¿que pasaría en el organismo?


6.- La actividad de la catalasa varía dependiendo en que órgano se encuentra, ¿en cuales órganos es mas elevada su actividad y en cuales es menos activa?