viernes, 30 de enero de 2015

Práctica de Bioquímica para veterinaria No.6 PROTEÍNAS: AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE

A REALIZARSE SEMANA DEL 21 AL 25 SEPTIEMBRE. NOTA. LA ACADEMIA DECIDIO NO REALIZAR LA PRÁCTICA 5, EN ESTA FECHA, POR ELLO SE HARÁ ESTA, ADEMÁS SE RECORRIÓ Y AJUSTÓ EL CALENDARIO DE PRÁCTICAS REVISARLO DE NUEVO Y ACTUALIZARLO.

Práctica de Bioquímica para veterinaria No.6



PROTEÍNAS: AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE



Objetivo

El alumno aislará la proteína caseína de la leche de vaca, aprovechando el punto isoeléctrico de dicha proteína.



Información general

Las proteínas son biopolímeros de alto peso molecular, formados por la unión de aminoácidos (unidos ellos a través de un enlace llamado peptídico). Por lo general para que una molécula reciba el nombre de proteína debe tener como mínimo 50 aminoácidos y un peso mínimo de 5,000 Daltones.



Las proteínas realizan funciones muy importantes dentro del cuerpo de los animales una de ellas es la función plástica, es decir forman parte de los órganos o tejidos presentes en el cuerpo, por ejemplo los músculos contienen actina y miosina, el pelo y la piel contienen queratina, la sangre contiene hemoglobina todas estas son proteínas.



Todas las enzimas que hacen posibles las reacciones que ocurren dentro d e las células, así como los anticuerpos que defienden al organismo contra infecciones son también proteínas, de aquí se desprende que sin la presencia de las proteínas en los individuos, la vida no seria posible.



Debido a que se encuentran ampliamente distribuidas en el cuerpo y los líquidos corporales, es posible aislar las proteínas de estos últimos; para el caso de la práctica se pretende aislar la caseína, la cual esta formada por la mezcla de varias proteínas que contienen fósforo y se haya presente como componente de la leche en una cantidad de aproximadamente 35 gramos/litro.



Para separar la caseína del resto de los componentes de la leche se va a recurrir a una propiedad que tienen las proteínas de poseer un punto isoeléctrico. El punto isoeléctrico se refiere al pH en el cual las proteínas son menos solubles, en base a esa menor solubilidad la caseína puede luego precipitarse, se usará alcohol debido a la caseína es insoluble en él y además el alcohol remueve la grasa de la leche.



Materiales Reactivos



Gasa Amortiguador de acetato pH4.6 0.2M

Embudo Buchner Etanol 95%

Papel filtro Éter

Vaso pp. 500 ml agua destilada

Vaso pp. 250 ml HCl 0.1 N

Varilla vidrio NaOH 0.1 N

Potenciómetro mezcla etanol: éter (1:1)

Caja Petri leche de vaca

Probeta 100 ml

Termómetro

2 pipetas 1ml

Bomba de vacío

Placa de calefacción

Manguera hule látex

matraz Kitasato 500 ml



Desarrollo del experimento



1.-En un vaso de precipitados de 500 ml colocar 100 ml de leche de vaca y calentarla en la placa de calentamiento hasta que alcance los 40°C.



2.-Al mismo tiempo colocar en un vaso de precipitados 100 ml del amortiguador de acetato en la placa de calentamiento y calentar hasta que alcance los 40°C.



3.-Añadir LENTAMENTE Y AGITANDO la solución de amortiguador de acetato al vaso que contiene la leche.



4.-Medir el pH de la mezcla usando un potenciómetro, la lectura debe ser aproximadamente de 4.8, de no ser así corregir el pH añadiendo unas gotas de HCl 0.1 N para acidificar, o usar gotas de NaOH 0.1N para alcalinizar según sea el caso requerido.



5.-Enfriar la suspensión a temperatura ambiente y dejar en reposo durante 5 minutos



6.-Colocar la gasa en el embudo Buchner, y el embudo en el matraz Kitasato, el cual a su vez se conecta a la bomba de vacío.



7.-Filtrar la suspensión del paso 5 a través del embudo Buchner.



8.-Lavar el precipitado que queda en el embudo 3 veces usando 20 ml de agua cada vez



9.-Pasar el precipitado a un vaso que contenga 30 ml de etanol al 95%



10.-Colocar un papel filtro en el embudo Buchner y hacer pasar por él la suspensión del paso 9.



11.-Lavar el precipitado del embudo Buchner usando 50 ml de una mezcla de etanol-éter.



12.-Lavar el precipitado con 50 ml de éter y secar manteniendo el vacío.



13.-Remover el polvo formado y colocarlo en el fondo de una caja de Petri (LA CUAL PESO ANTES), con el fin de permitir que se evaporen los residuos de éter.



14.-Pesar la caja de Petri con la caseína y calcular el porcentaje en que se pudo recuperar la proteína.

CUESTIONARIO

** Práctica 5   Aislamiento de la caseína de la leche **

1.- Investigue que es la caseína y cual es su composición bioquímica

2.- ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la caseína y que ocurre bioquímicamente al llegar a este punto?

3.- ¿Cuál es la enzima presente en el estómago de los animales que provoca la precipitación de la caseína?


4.- En la leche la caseína se encuentra como una dispersión de partículas (micelas). ¿Cuáles son los 2 factores que logran la estabilidad de éstas micelas de caseína?



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