viernes, 30 de enero de 2015

PRÁCTICA NO. 7 HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL

A REALIZARSE SEMANA 28 SEPTIEMBRE AL 2 DE OCTUBRE DE 2015

PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 7




ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL



OBJETIVO



El alumno demostrara la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.



INFORMACION GENERAL



Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.

La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.



La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón.

La amilasa actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).



La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.



En el caso del hombre, la producción de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.

La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.

Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.



FUNDAMENTO DE LA PRACTICA



Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.





MATERIALES REACTIVOS

2 pipetas de 5 ml Solución de lugol

2 pipetas de 1 ml Saliva

2 vasos p.p. 100 ml Sol. Almidón al 2%

2 vasos p.p. 250 ml HCL 0.25 N

6 tubos de ensayo 13 x 100 mm NaOH 0.25 N

1 mechero

1 tripié

1 tela de asbesto

1 gradilla

1 termómetro

1 embudo

1 trozo de gasa

Cubos de hielo

4 tiras indicador de pH universal



DESARROLLO DEL EXPERIMENTO



 1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva.



 2. Prepare un baño María a una temperatura de 40 grados centígrados



3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:



                                       Tubo 1               Tubo 2                Tubo 3              Tubo 4

Sol. Almidón                    2ml                    2 ml                      2 ml                     2 ml

Lugol                                3 gotas              3 gotas                  3 gotas                3 gotas

Sol. HCL                          1 ml

Sol. NaOH                                                 1 ml

Saliva                                1 ml                   1 ml                     1 ml                        1 ml



4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos



5. Coloque los tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitado con hielo picado.

6.-Agite los tubos ocasionalmente y tome el tiempo necesario para que el color negro o azul  desaparezca. Anote en que tubos desparece el color violeta y en cuales no.

** Hidrólisis del almidón por la Amilasa Salival **

1.- En función de  su acción catalítica específica, las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos. Investíguelos y explique la forma de acción que tiene cada uno de los grupos.

2.- En base a lo investigado anteriormente, ¿En que clasificación se encuentra la amilasa? ¿Por qué?

3.-  ¿Cuál es la diferencia entre la  S-amilasa y la P- amilasa?

4.- Investigue como se le llama a la sustancia sobre la cual actúa una enzima.

5.- ¿Cuáles son los 3 principales factores que afectan la actividad enzimática? Investigue a profundidad los cambios bioquímicos que ocurren en las enzimas por el efecto de estos 3 factores.

6.- ¿De qué tipo de iones es dependiente la amilasa para poder realizar su función?

7.- ¿Cuál es el pH óptimo de la amilasa?

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