A REALIZARSE LA SEMANA 24 A 28 AGOSTO 2015
OBJETIVO
El alumno conocerá las formas más comunes de expresar la concentración de las soluciones que se emplean en el laboratorio de bioquímica.
INFORMACIÓN GENERAL
En el laboratorio de bioquímica y en algunos otros que usted cursará posteriormente, se usaran con frecuencia soluciones de diferente denominación; las cuales deben ser preparadas con exactitud para que los resultados de los procesos experimentales o analíticos sean adecuados. Aún cuando usted recibirá en este laboratorio las soluciones ya preparadas, es conveniente sin embargo saber cómo se efectúa dicha preparación y que es lo que expresa el término que se usa para denominarlas.
Una solución puede ser definida como “una dispersión ópticamente homogénea de una sustancia en otra”; con ópticamente homogénea queremos dar a entender que a simple vista no distinguimos los elementos que se hayan mezclados para formar esa solución. En una disolución de una sustancia en otra, la sustancia disuelta se denomina como SOLUTO, mientras que la sustancia en donde se disuelve el soluto se llama SOLVENTE O DISOLVENTE.
Cuando la cantidad relativa de una sustancia en una disolución es mucho mayor que la de la otra, la sustancia presente en mayor cantidad se considera como el solvente. Cuando las cantidades relativas de las dos sustancias son del mismo orden de magnitud resulta difícil, y además arbitrario especificar cuál es el disolvente.
La concentración de una solución indica la cantidad exacta de soluto que existe en un volumen o peso dado de la solución. Esa concentración puede ser expresada en unidades físicas, por ejemplo: peso de soluto por unidad de volumen de la solución; o bien puede ser expresada en unidades químicas, por ejemplo: normalidad, molaridad.
Siempre que no se especifique el solvente empleado, debe suponerse que se trata de agua destilada. Los tipos de soluciones que con mayor frecuencia se utilizan en el laboratorio de bioquímica son los siguientes:
1.-Soluciones porcentuales
2.-Soluciones molares
3.-Soluciones Molales
4.-Soluciones Osmolares
5.-Soluciones tonicas
6.-Soluciones Normales
1.-Soluciones porcentuales
Este tipo de expresión no es químico, sino físico y podemos dividirlas en 3 grupos:
a) a) Porciento peso sobre volumen (% p/v). Se preparan cuando se disuelve un sólido en un líquido. Ejemplo: una solución 15% p/v de glucosa , significa que se pesan 15 gramos de glucosa y se les añade agua destilada hasta completar un volumen de 100 ml.
b) b) Porciento volumen sobre volumen (% v/v). Se recurre a prepararlas cuando la solución va a estar formada por 2 líquidos. Ejemplo: una solución 70% v/v de alcohol etílico significa que se miden 70 ml de alcohol puro al 100% y se le añaden a esos 70 ml de alcohol agua destilada hasta completar 100 ml.
c) c) Porciento peso sobre peso (% p/p). Se puede emplear tanto para mezclar 2 líquidos entre sí, o bien 2 sólidos (esto último es menos usual), y en ocasiones aún menos frecuentes se puede mezclar un sólido y un líquido en base a una solución % p/p.
Ejemplo: una solución 30% p/p de glicerina nos indica que debemos pesar 30 gramos de glicerina y luego añadir pesando la cantidad necesaria del solvente (agua) para completar los 100 gramos.
En el caso de mezclar 2 sólidos por ejemplo: una solución 5% p/p de yodo en yoduro de potasio, significa que debemos pesar 5 gramos de yodo y añadir la cantidad necesaria de yoduro de potasio que se necesite para completar los 100 gramos.
2.-Soluciones molares
Este es un tipo de solución en el cual las unidades se fijan en base a un factor químico.
Por definición una solución molar es aquella en la cual cada litro de solución contiene el peso molecular en gramos de la sustancia disuelta.
Ejemplo: se requiere preparar 250 ml de una solución 0.3 molar de NaOH (hidróxido de sodio).
P.a. del H =1 P.a=peso atómico del elemento
P.a del Na =23
P.a del O =16
P.molecular =40
De acuerdo con la definición : 40 gramos de NaOH en 1 litro serían una solución 1 molar, debido a que requerimos solo 250 ml y a 0.3 molar, efectuamos las siguientes reglas de tres para llegar a la solución que se nos pide.
Primera regla de tres
40 gr NaOH---------->1 mol
“X” gr NaOH------->0.3 mol
“X”= 12 gramos de NaOH
Segunda regla de tres
12 gr de NaOH-------------->1,000 ml
“X” gr de NaOH------------->250 ml
“X”= 3 gramos
O sea que si disolvemos 3 gramos de NaOH en un volumen de 250 ml de agua obtenemos la solución 0.3 molar de NaOH.
3.-Soluciones molales
Esta forma de preparar una solución no se usa con tanta frecuencia como la anteriormente descrita con la cual esta emparentada. A la molalidad se le llama también “molaridad en peso” ya que por definición una solución molal es aquella que expresa los moles de soluto que existen por kilogramo de solvente; aquí está la diferencia con relación a la solución molar, en la solución molar el soluto se mide hasta el volumen requerido, mientras que en la solución molal el soluto se pesa hasta alcanzar la cantidad requerida.
Ejemplo: Una solución 1 molal de H2SO4 (ácido sulfúrico) en agua, se prepara pesando 98 gramos de H2SO4 (1 mol) en la cantidad de agua necesaria para que la mezcla de 1 kilo de peso, como ya se menciono no es muy usual proceder así; en la práctica se preferiría expresar la concentración en molaridad y no en molalidad.
4.-Soluciones osmolares
En el laboratorio de bioquímica este tipo de soluciones no son muy usuales, pero sí lo son en el laboratorio de fisiología. Por definición una solución osmolar es aquella que contiene en 1 litro de solución 1 osmol de la sustancia en gramos.
Un osmol es la unidad de actividad osmótica de la sustancia y puede estar representado por un ión, un radical o una molécula. Para poder preparar este tipo de soluciones debemos de tomar en cuenta si la sustancia se disocia o no (si se separa en iones o no) cuando se suspende en agua.
Ejemplo: el NaCl (cloruro de sodio) al ser suspendido en agua se disocia (separa) en 2 tipos de iones, un anión (ión negativo) representado por el Cl-, y un catión (ión positivo) representado por el Na+; de tal forma que si el peso molecular del NaCl es de 58.5 gramos, una solución osmolar (1 osmol) de NaCl contendrá 58.5gr/2 iones = 29.25 gramos, si colocamos esos 29.25 gramos en 1 litro de agua destilada obtenemos una solución 1 osmol de NaCl.
5.-Soluciones Tónicas
Este tipo de soluciones están muy emparentadas con las del inciso anterior (osmolares), en base al conocimiento de la definición de una solución osmolar, podemos preparar las soluciones tónicas. El término “tónicas” hace referencia a la cantidad de partículas osmóticamente activas que existen cuando se les compara con referencia a la presión osmótica que tiene el plasma sanguíneo (cuyo valor es de 0.3 osmoles/litro), de acuerdo con este criterio existen 3 tipos de soluciones tónicas:
a) a) Hipotónicas.-aquellas que tienen menor presión osmótica que la del plasma sanguíneo, es decir menor de 0.3 osmoles/litro.
b) b) Isotónicas.-son aquellas que tienen una presión osmótica igual a la del plasma sanguíneo, es decir igual a 0.3 osmoles/litro
c) c) Hipertónicas.- son aquellas que tienen una presión osmótica mayor a la del plasma sanguíneo, es decir mayor a 0.3 osmoles/litro
Ejemplo: Una solución isotónica de NaCl (cloruro de sodio) es aquella que contiene 0.3 osmoles, o sea que si el peso molecular del NaCl es de 29.25 gramos;
29.25 gr de NaCl---------------> 1 osmol
“X” gr de NaCl-----------------> 0.3 osmol
“X”= 8.775 gramos de NaCl/litro son una solución isotónica.
Si se usan menos de 8.775 gramos/ lt obtendremos una solución hipotónica, mientras que si usamos más de 8.775 gr/lt preparamos una solución hipertónica (para el caso del NaCl).
6.-Soluciones Normales
La preparación de este tipo de soluciones es muy usual en el laboratorio de bioquímica. Por definición una solución normal : es aquella que contiene el “peso equivalente” en gr/ lt. de solución.
El “peso equivalente” de una sustancia es : el número de unidades de la sustancia que pueden combinarse o remplazar a un ión de hidrógeno (H). Mientras que el equivalente gramo de una sustancia es el peso equivalente de la sustancia expresado en gramos.
La determinación del “peso equivalente” es lo que debe de hacerse primero para poder preparar este tipo de soluciones. La forma como se calcula este peso equivalente es variable, dependiendo de si el compuesto químico es un ácido, una base, una sal, un agente oxidante, un agente reductor, o bien un elemento, veremos a continuación ejemplos de como se calcula el peso equivalente para diferentes compuestos.
Peso equivalente para ácidos y bases
Para estos casos, la unidad este definida por la siguiente reacción: H+OH----------àH2O
Cálculo del peso equivalente ejemplo para los ácidos
En el caso de un ácido, si tomamos como ejemplo el HCl (ácido clorhídrico), el peso equivalente sería igual al peso formular del HCl/1 debido a que aporta un hidrógeno (H), mientras que para el caso del H2SO4 (ácido sulfúrico) el peso equivalente es igual al peso molecular sobre 2 (debido a que aporta 2 H).
No existe una regla sencilla y definida para predecir cuántos hidrógenos de un ácido deben remplazarse en una neutralización determinada, sobre todo para el caso de los llamados “ácidos débiles”, en los cuales la neutralización puede ser parcial o total, por ejemplo, en el caso del ácido fosfórico H3PO4, para este ácido el peso equivalente puede ser de 1, 1/2 o 1/3 del peso molecular del H3PO4, dependiendo de cómo se comporte el ácido en la reacción puede aportar 1, 2 o 3 de sus hidrógenos (H), es por ello que en muchos casos debemos de conocer el comportamiento de la sustancia en la reacción.
Cálculo del peso equivalente ejemplo para las bases
En el caso de las bases el peso equivalente es la cantidad de sustancia que puede suministrar un radical OH, o bien reaccionar con un H por ejemplo:
Para el hidróxido de aluminio Al(OH)3 el peso equivalente es igual al peso molecular/3, mientras que para el hidróxido de magnesio Mg(OH)2, el peso equivalente es igual al peso molecular/2; mientras que para el amonio NH3, que puede reaccionar con el agua y dar NH4+OH, el peso equivalente es igual al peso molecular/1.
Cálculo del peso equivalente ejemplo para las sales
Para estos compuestos, en el cálculo del peso equivalente es necesario saber si la sal se está usando como ácido o como base, además debemos de conocer cómo se comporta en la reacción que se esta llevando a cabo, pare determinar si aporta 1, 2 o 3 unidades a la reacción de neutralización que sirve de referencia.
Ejemplos:
Sal Reacción típica Peso equivalente
NH4Cl (cloruro amonio) NH4+OH-----àNH3+H2O Igual a peso formular
Na2CO3 (bicarbonato sodio) CO3+2H-----àCO2+H2O Peso formular/2
Cálculo del peso equivalente ejemplo para agentes oxidantes y reductores
Un agente oxidante o reductor , puede tener más de un peso equivalente, ello va a depender de la reacción para la cual se usa. El peso equivalente para un agente oxidante o reductor, es igual a su peso formular (o peso molecular) dividido entre el número total de electrones ganados o perdidos cuando se efectúa la reacción o sea que:
Peso equivalente= Peso formular de la sustancia oxidante o reductiva
Número de electrones ganados o perdidos
Ejemplo: Se hace reaccionar Permanganato de potasio KMnO4 (agente oxidante) con ácido clorhídrico HCL (agente reductor), y se requiere determinar el peso equivalente del KMnO4 como oxidante, la reacción y los productos que se generan se muestran a continuación: KMnO4 + HCl-------àMnCl2 + KCl + H2O
Analizando la reacción observamos que el estado de oxidación del Mn en el KMnO4 es de +7, mientras que en el MnCl2 es de +2, el cambio en el estado de oxidación es de 5, por lo tanto el peso equivalente del KMnO4 es = Peso formular/ cambio en edo. de oxidación.
P.equivalente del KMnO4= 158/5= 31.6
Cálculo del peso equivalente ejemplo para elementos
Para calcular el peso equivalente de un elemento sencillo, se divide el peso atómico entre el estado de oxidación. Cuando dos elementos se combinan para formar un compuesto para cada elemento, el número de electrones transferidos por cada átomo, representa el estado de oxidación del compuesto.
Ejemplo: En una reacción determinada entre plata Ag, y magnesio Mg, 0.3636 gramos de Mg reaccionan con 3.225 gramos de plata. Si el peso equivalente de la plata es de 107.87 gramos, calcular el peso equivalente del magnesio.
Si 3.225 gr de Ag-------à Reaccionan con 0.3336 gr de Mg
1 gr de Ag------------à Reacciona con “X” gr Mg
“X” gr Mg= 0.3336/3.225= 0.1127
p.equivalente de Ag= 107.87 * 0.1127= 12.156 gramos de Mg
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viernes, 30 de enero de 2015
PRÁCTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No.2 DETERMINACION CUALITATIVA DE ALGUNOS ELEMENTOS PRIMARIOS PRESENTES EN LA MATERIA ORGANICA
A REALIZARSE LA SEMANA DEL 31 AGOSTO AL 4 SEPTIEMBRE DE 2015
OBJETIVO
El alumno identificará algunos elementos biogenésicos primarios presentes en la materia orgánica, demostrará además que los compuestos inertes, participan también en la formación de estructuras celulares.
INFORMACION GENERAL
La Bioquímica, se encarga del estudio de las reacciones químicas que tienen lugar dentro de los seres vivos, estudia además la composición y comportamiento de la materia que integra a las moléculas orgánicas (biomoléculas).
La materia orgánica se caracteriza por la presencia de manera muy abundante de CARBONO (C), sin embargo, existen otros átomos que también se presentan de forma más o menos constante y son principalmente: OXIGENO (O), HIDROGENO (H), NITROGENO (N), AZUFRE (S) y FOSFORO (P); los cuales son también elementos que se hallan presentes en los compuestos de tipo inorgánico. Como podemos observar entonces, la materia viva y la no viva (inerte), se encuentran formadas por los mismos elementos, sólo que éstos se encuentran en proporciones diferentes, y se comportan también en algunos casos, de manera diferente.
DESARROLLO DE LOS EXPERIMENTOS.
1- DETERMINACION DE CARBONO.
1. Rotular 2 tubos de ensayo, marcalos como A y B.
2. Añada al tubo A, 1 gramo de óxido cúprico y caliente a la llama del mechero por 2 minutos, pasados los cuales añadirá al mismo tubo 0.5 gramos de sacarosa.
3. Coloque el tapón que contiene el tubo de vidrio acodado en la boca del tubo A.
4. En el tubo B, coloque 5 ml de solución de barita.
5. Introduzca el extremo libre del tubillo de vidrio (del tubo marcado como A), en el tubo B, cuidando que la punta del tubillo haga contacto con el líquido que contiene el tubo B.
6. Caliente a la flama del mechero el tubo A, por un tiempo de 2 minutos, o el tiempo suficiente para apreciar desprendimiento de gases que pasarán desde el tubo A hacia el B.
2- DETERMINACION DE NITROGENO
1. Colocar en el tubo de ensayo 1 gramo de carne, calentar a la flama del mechero por 1 minuto o hasta que halla desprendimiento de gases de olor penetrante.
2. Humedecer en agua destilada una tira de indicador universal de ph y acercarla a la boca del tubo para que se impregne con los vapores que éste emite. Tomar la lectura del ph.
3. Sumergir una varilla de vidrio en HCl concentrado para que se impregne de este, acercar la varilla a la boca del tubo de ensayo, observar qué ocurre.
3- DETERMINACION DE AZUFRE
1. Colocar en un tubo de ensayo 1 gramo de albúmina de huevo.
2. añadir 5 ml de NaOH, más 2 gotas de acetato de plomo.
3. Calentar a la flama del mechero por 1 minuto, con cuidado para no quemar la muestra y observar.
4- DETERMINACION DE FOSFORO
1. Coloque en un tubo de ensayo 1 gramo de caseína.
2. Añadir 1 gramo de nitrato de potasio (KNO3), más 2 granallas de hidróxido de potasio (KOH).
3. Calentar al mechero durante 1 minuto con flama suave, y dejar enfriar; añadir 10 ml de agua destilada.
4. Filtrar a través de papel filtro de poro grueso, recibir el precipitado en un tubo de ensayo limpio (o en un vaso de precipitados).
5. Con una pipeta tome 3 ml del filtrado, transfiéralos a un tubo de ensayo limpio.
6. Añada 2 ml de HNO3 concentrado (CON CUIDADO YA QUE ES CORROSIVO), al tubo que contiene el filtrado, añada además 4 ml de solución de molibdato de amonio.
7. Caliente con llama suave del mechero durante 30 segundos, observe el color que aparece.
CUESTIONARIO
OBJETIVO
El alumno identificará algunos elementos biogenésicos primarios presentes en la materia orgánica, demostrará además que los compuestos inertes, participan también en la formación de estructuras celulares.
INFORMACION GENERAL
La Bioquímica, se encarga del estudio de las reacciones químicas que tienen lugar dentro de los seres vivos, estudia además la composición y comportamiento de la materia que integra a las moléculas orgánicas (biomoléculas).
La materia orgánica se caracteriza por la presencia de manera muy abundante de CARBONO (C), sin embargo, existen otros átomos que también se presentan de forma más o menos constante y son principalmente: OXIGENO (O), HIDROGENO (H), NITROGENO (N), AZUFRE (S) y FOSFORO (P); los cuales son también elementos que se hallan presentes en los compuestos de tipo inorgánico. Como podemos observar entonces, la materia viva y la no viva (inerte), se encuentran formadas por los mismos elementos, sólo que éstos se encuentran en proporciones diferentes, y se comportan también en algunos casos, de manera diferente.
DESARROLLO DE LOS EXPERIMENTOS.
1- DETERMINACION DE CARBONO.
1. Rotular 2 tubos de ensayo, marcalos como A y B.
2. Añada al tubo A, 1 gramo de óxido cúprico y caliente a la llama del mechero por 2 minutos, pasados los cuales añadirá al mismo tubo 0.5 gramos de sacarosa.
3. Coloque el tapón que contiene el tubo de vidrio acodado en la boca del tubo A.
4. En el tubo B, coloque 5 ml de solución de barita.
5. Introduzca el extremo libre del tubillo de vidrio (del tubo marcado como A), en el tubo B, cuidando que la punta del tubillo haga contacto con el líquido que contiene el tubo B.
6. Caliente a la flama del mechero el tubo A, por un tiempo de 2 minutos, o el tiempo suficiente para apreciar desprendimiento de gases que pasarán desde el tubo A hacia el B.
2- DETERMINACION DE NITROGENO
1. Colocar en el tubo de ensayo 1 gramo de carne, calentar a la flama del mechero por 1 minuto o hasta que halla desprendimiento de gases de olor penetrante.
2. Humedecer en agua destilada una tira de indicador universal de ph y acercarla a la boca del tubo para que se impregne con los vapores que éste emite. Tomar la lectura del ph.
3. Sumergir una varilla de vidrio en HCl concentrado para que se impregne de este, acercar la varilla a la boca del tubo de ensayo, observar qué ocurre.
3- DETERMINACION DE AZUFRE
1. Colocar en un tubo de ensayo 1 gramo de albúmina de huevo.
2. añadir 5 ml de NaOH, más 2 gotas de acetato de plomo.
3. Calentar a la flama del mechero por 1 minuto, con cuidado para no quemar la muestra y observar.
4- DETERMINACION DE FOSFORO
1. Coloque en un tubo de ensayo 1 gramo de caseína.
2. Añadir 1 gramo de nitrato de potasio (KNO3), más 2 granallas de hidróxido de potasio (KOH).
3. Calentar al mechero durante 1 minuto con flama suave, y dejar enfriar; añadir 10 ml de agua destilada.
4. Filtrar a través de papel filtro de poro grueso, recibir el precipitado en un tubo de ensayo limpio (o en un vaso de precipitados).
5. Con una pipeta tome 3 ml del filtrado, transfiéralos a un tubo de ensayo limpio.
6. Añada 2 ml de HNO3 concentrado (CON CUIDADO YA QUE ES CORROSIVO), al tubo que contiene el filtrado, añada además 4 ml de solución de molibdato de amonio.
7. Caliente con llama suave del mechero durante 30 segundos, observe el color que aparece.
CUESTIONARIO
1.- Durante el desarrollo de
la parte de determinación de Carbono, ¿a que se debe la aparición del
precipitado blanco en el tubo B ?
2.- ¿Qué compuesto se
desprende principalmente en los gases de olor penetrante al quemar la carne?
3.- Al tomar el pH de los
vapores desprendidos ¿Cómo debe ser el pH: ácido o alcalino? ¿Por qué?
4.- Investiga que tipo de
biomolécula es la albúmina contenida en el huevo
5.- ¿Qué se forma al
reaccionar el azufre y el acetato de plomo? Investiga la reacción química completa y escríbela,
indicando los nombres de los reactivos y
del producto.
6.- Investiga que es la
caseína y en que productos se encuentra
7.- ¿Qué compuesto se forma
al reaccionar el fósforo presente en la caseína con el amonio? Investiga y
escribe la reacción química que se produce, anotando los nombres de los
reactivos y productos.
Práctica de Bioquímica para veterinaria No.4 pH y Soluciones amortiguadoras
A REALIZARSE LA SEMANA 14 18 DE SEPTIEMBRE DE 2015
PH Y SISTEMAS AMORTIGUADORES
OBJETIVO
El alumno comprenderá la importancia que tienen los sistemas amortiguadores o buffers, para el buen desempeño de las funciones vitales en los seres vivos, preparara una mezcla buffer, y efectuara mediciones colorimétricas y potenciométricas del ph.
INFORMACIÓN GENERAL
Para mantener la vida, es necesario que se produzcan una serie de reacciones dentro del cuerpo de los animales, estas reacciones son sumamente delicadas y dependen de que varios factores permanezcan casi constantes, o con muy ligera variación, entre los factores mas críticos están una temperatura adecuada, y un ph que muestre un rango de variación muy estrecho.
¿Qué es el ph?. Cuando se hace referencia a este termino, lo que queremos es expresar el grado de acidez o alcalinidad que tiene un medio o un material , a su vez, este grado de acidez o alcalinidad, depende de la cantidad de iones hidrógeno (H), o de iones oxidrilo (OH), que posee la muestra.
A mayor cantidad de iones H, se dice que la muestra tiene un ph mas bajo (o ácido), mientras que a menor cantidad de iones h, la muestra tiene un ph mas alto ( o alcalino).
Existen varios criterios para definir a un ácido o a un álcali o base. Según Arrehenius, “ácidos, son las substancias que producen iones hidrógeno en solución”, mientras que “ bases o álcalis, son las substancias que producen iones oxidrilo en solución.
En 1923, Lowry y Bronsted, desarrollaron la teoría ácido-base, según la cual, “ácido es toda aquella sustancia molecular o iónica capaz de ceder un protón, mientras que “base, es toda substancia molecular o iónica, capaz de aceptar un protón “.
Debemos hacer notar, que la actividad de una substancia como ácido o como base, depende de su facilidad para aceptar o ceder un protón.
Generalmente, el grado de acidez o alcalinidad de una solución, se describe en función de la concentración de iones hidrógeno ( aun cuando se trate de una solución alcalina o básica).
La concentración de ion H, se puede expresar en moles / litro, o en unidades de ph, esta ultima unidad es la mas empleada en los trabajos de laboratorio.
La escala de ph utilizada actualmente para medir la concentración de iones de hidrógeno, fue desarrollada por Sorensen en 1909, según Sorensen “el ph de una solución representa el valor negativo del logaritmo de la concentración de iones de hidrógeno”, y puede expresarse con la siguiente formula:
PH = - Log ( H + )
Ejemplo: Calcular el pH de una solución si la concentración de iones de hidrogeno es de 1.92 por 10 - 5 moles / litro.
Ph = - Log. (H+)
Ph = - Log. (1.92 por 10 -5 )
Ph = 4.72
A nivel de laboratorio, existen dos formas de medir el ph de una solución:
1.-Por el metido colorimétrico el cual se basa en el uso de indicadores. Un indicador, es una sustancia capaz de cambiar de color, dependiendo del ph que tenga el medio.
2.-Método potenciométrico, en este caso se usa un aparato llamado potenciómetro, el cual básicamente consiste de un electrodo de vidrio que introducido en la solución mide la fuerza electromotriz de esta (la fuerza electromotriz, a su vez depende de a actividad del ion H).
LOS BUFFERS O AMORTIGUADORES
Son substancias que se oponen al cambio brusco de ph de un medio, se les llama también solución tampón, se hayan formadas por un ácido débil y una sal de dicho ácido.
En los sistemas biológicos, existen 5 buffers principales que mantienen el ph de la sangre dentro de los limites aceptables para la vida. De estos 5, el principal es el sistema Bicarbonato-Ácido carbónico.
(HCO3)-(H2CO3).
La concentración de iones de hidrógeno de un buffer o amortiguador , se puede calcular usando la ecuación de Henderson-Haselbach, según la cual :
ph = Pka + Log. (Sal) /(acido)
El Pka= constante de ionizacion para el ácido, es un valor definido por unas tablas de disociación que se consulta en los manuales de bioquímica.
Ejemplo: Calcular el ph de una solución buffer formada por Na2 H2PO4 (la sal), 0.25 molar y K H2PO4 (el ácido), 0.15 molar. El Pka tiene un valor de 7.2
pH = Pka + Log. (Sal)/ (acido)
pH = 7.2 + Log. 0.25/0.15
pH= 7.2 + Log. (1.666)
pH = 7.2 + (0.22)
pH= 7.42
MATERIALES Y REACTIVOS
15 tubos de ensayo de 150 por 15 mm Na2HPO4 0.15 molar
1 gradilla para tubos de ensayo K H2PO4 0.15 molar
4 pipetas de 1 ml. Azul de bromotil
2 pipetas de 10 ml. NaOH 0.4 N
3 vasos de precipitado de 50 ml. HCL 0.4 N
5 tiras de indicador de ph universal Buffer referencia ph 4
1 potenciómetro para ph Buffer referencia ph 7
DESARROLLO DE LOS EXPERIMENTOS
3.1- Preparación de una solución amortiguadora o buffer
1.-Rotular 12 tubos de ensayo. Marcarlos del 1 al 10.
2.- Depositar en cada tubo con una pipeta , las soluciones y cantidades mostradas, TENGA CUIDADO DE MEDIR LAS CANTIDADES EXACTAS, Y USAR UNA PIPETA PARA LA SAL (Na2HPO4), Y OTRA DIFERENTE PARA EL ACIDO (KHPO4).
Tubo Na2HPO4 ml. KH2PO4 ml pH. Esperado
1 9.7 0.3 8.2
2 9.5 0.5 8.0
3 9.2 0.8 7.8
4 8.7 1.3 7.6
5 8.0 2.0 7.4
6 7.1 2.9 7.2
7 6.1 3.9 7.0
8 5.0 5.0 6.8
9 3.8 6.2 6.6
10 2.7 7.3
3.2 - MEDICION POTENIOMETRICA DEL PH
Con la ayuda de su instructor, tome la lectura de los tubos 1,5 y 10 con el potenciómetro, anote sus lecturas obtenidas.
3.3 – USO DE TIRA INDICADOR UNIVERSAL PARA MEDIR PH
Introduzca una tira de indicador universal de PH (una por cada tubo).
En los tubos numero 1, 5 , y 10, compare los colores desarrollados con la que muestra la tabla con que acompaña el frasco de las tiras.
3.4 – DETERMINACIÓN DE PH POR USO DE UN INDICADOR
A cada uno de los tubos del experimento 3.1, añádales dos gotas de indicador azul de bromotil, mezclar bien y anotar los colores desarrollados en cada uno de los tubos .
3.5 – EFECTOS DE UN BUFFER PARA OPONERSE A LOS CAMBIOS DE PH
1.- Con una tira de indicador universal, tome el PH de la solución de NaOH 0.4 N. Anote el resultado.
2.- Repita el procedimiento usando una tira nueva para tomar el PH de la solución de HCL 0.4 N. Anote el resultado.
3.- Al tubo numero 7 del experimento 3.1, retírele 5 ml usando una pipeta limpia, transfiéralos a un nuevo tubo de ensayo y rotúlelo con 7b; al tubo original marcado como tubo numero 7, identifíquelo apartir de este momento como tubo 7 a .
4.- A los 5 ml. Del tubo 7 a, añadir gota a gota con una pipeta, solución de NaOH 0.4 N, contar las gotas requeridas para que el color de la solución del tubo numero 7 a, se igual a la del tubo numero 1.
5.- A los 5 ml. Del tubo 7b, añadir gota a gota con una pipeta, solución de HCL 0.4 N, contar el numero de gotas requeridas para que el color de la solución del tubo 7b , vire asta amarillo intenso.
6.- A los 5 ml. Del tubo numero 1 original, añadirles con cuidado, gota a gota con una pipeta, solución de HCL 0.4 N y contar el numero de gotas necesarias para virar el color amarillo intenso.
CUESTIONARIO
PH Y SISTEMAS AMORTIGUADORES
OBJETIVO
El alumno comprenderá la importancia que tienen los sistemas amortiguadores o buffers, para el buen desempeño de las funciones vitales en los seres vivos, preparara una mezcla buffer, y efectuara mediciones colorimétricas y potenciométricas del ph.
INFORMACIÓN GENERAL
Para mantener la vida, es necesario que se produzcan una serie de reacciones dentro del cuerpo de los animales, estas reacciones son sumamente delicadas y dependen de que varios factores permanezcan casi constantes, o con muy ligera variación, entre los factores mas críticos están una temperatura adecuada, y un ph que muestre un rango de variación muy estrecho.
¿Qué es el ph?. Cuando se hace referencia a este termino, lo que queremos es expresar el grado de acidez o alcalinidad que tiene un medio o un material , a su vez, este grado de acidez o alcalinidad, depende de la cantidad de iones hidrógeno (H), o de iones oxidrilo (OH), que posee la muestra.
A mayor cantidad de iones H, se dice que la muestra tiene un ph mas bajo (o ácido), mientras que a menor cantidad de iones h, la muestra tiene un ph mas alto ( o alcalino).
Existen varios criterios para definir a un ácido o a un álcali o base. Según Arrehenius, “ácidos, son las substancias que producen iones hidrógeno en solución”, mientras que “ bases o álcalis, son las substancias que producen iones oxidrilo en solución.
En 1923, Lowry y Bronsted, desarrollaron la teoría ácido-base, según la cual, “ácido es toda aquella sustancia molecular o iónica capaz de ceder un protón, mientras que “base, es toda substancia molecular o iónica, capaz de aceptar un protón “.
Debemos hacer notar, que la actividad de una substancia como ácido o como base, depende de su facilidad para aceptar o ceder un protón.
Generalmente, el grado de acidez o alcalinidad de una solución, se describe en función de la concentración de iones hidrógeno ( aun cuando se trate de una solución alcalina o básica).
La concentración de ion H, se puede expresar en moles / litro, o en unidades de ph, esta ultima unidad es la mas empleada en los trabajos de laboratorio.
La escala de ph utilizada actualmente para medir la concentración de iones de hidrógeno, fue desarrollada por Sorensen en 1909, según Sorensen “el ph de una solución representa el valor negativo del logaritmo de la concentración de iones de hidrógeno”, y puede expresarse con la siguiente formula:
PH = - Log ( H + )
Ejemplo: Calcular el pH de una solución si la concentración de iones de hidrogeno es de 1.92 por 10 - 5 moles / litro.
Ph = - Log. (H+)
Ph = - Log. (1.92 por 10 -5 )
Ph = 4.72
A nivel de laboratorio, existen dos formas de medir el ph de una solución:
1.-Por el metido colorimétrico el cual se basa en el uso de indicadores. Un indicador, es una sustancia capaz de cambiar de color, dependiendo del ph que tenga el medio.
2.-Método potenciométrico, en este caso se usa un aparato llamado potenciómetro, el cual básicamente consiste de un electrodo de vidrio que introducido en la solución mide la fuerza electromotriz de esta (la fuerza electromotriz, a su vez depende de a actividad del ion H).
LOS BUFFERS O AMORTIGUADORES
Son substancias que se oponen al cambio brusco de ph de un medio, se les llama también solución tampón, se hayan formadas por un ácido débil y una sal de dicho ácido.
En los sistemas biológicos, existen 5 buffers principales que mantienen el ph de la sangre dentro de los limites aceptables para la vida. De estos 5, el principal es el sistema Bicarbonato-Ácido carbónico.
(HCO3)-(H2CO3).
La concentración de iones de hidrógeno de un buffer o amortiguador , se puede calcular usando la ecuación de Henderson-Haselbach, según la cual :
ph = Pka + Log. (Sal) /(acido)
El Pka= constante de ionizacion para el ácido, es un valor definido por unas tablas de disociación que se consulta en los manuales de bioquímica.
Ejemplo: Calcular el ph de una solución buffer formada por Na2 H2PO4 (la sal), 0.25 molar y K H2PO4 (el ácido), 0.15 molar. El Pka tiene un valor de 7.2
pH = Pka + Log. (Sal)/ (acido)
pH = 7.2 + Log. 0.25/0.15
pH= 7.2 + Log. (1.666)
pH = 7.2 + (0.22)
pH= 7.42
MATERIALES Y REACTIVOS
15 tubos de ensayo de 150 por 15 mm Na2HPO4 0.15 molar
1 gradilla para tubos de ensayo K H2PO4 0.15 molar
4 pipetas de 1 ml. Azul de bromotil
2 pipetas de 10 ml. NaOH 0.4 N
3 vasos de precipitado de 50 ml. HCL 0.4 N
5 tiras de indicador de ph universal Buffer referencia ph 4
1 potenciómetro para ph Buffer referencia ph 7
DESARROLLO DE LOS EXPERIMENTOS
3.1- Preparación de una solución amortiguadora o buffer
1.-Rotular 12 tubos de ensayo. Marcarlos del 1 al 10.
2.- Depositar en cada tubo con una pipeta , las soluciones y cantidades mostradas, TENGA CUIDADO DE MEDIR LAS CANTIDADES EXACTAS, Y USAR UNA PIPETA PARA LA SAL (Na2HPO4), Y OTRA DIFERENTE PARA EL ACIDO (KHPO4).
Tubo Na2HPO4 ml. KH2PO4 ml pH. Esperado
1 9.7 0.3 8.2
2 9.5 0.5 8.0
3 9.2 0.8 7.8
4 8.7 1.3 7.6
5 8.0 2.0 7.4
6 7.1 2.9 7.2
7 6.1 3.9 7.0
8 5.0 5.0 6.8
9 3.8 6.2 6.6
10 2.7 7.3
3.2 - MEDICION POTENIOMETRICA DEL PH
Con la ayuda de su instructor, tome la lectura de los tubos 1,5 y 10 con el potenciómetro, anote sus lecturas obtenidas.
3.3 – USO DE TIRA INDICADOR UNIVERSAL PARA MEDIR PH
Introduzca una tira de indicador universal de PH (una por cada tubo).
En los tubos numero 1, 5 , y 10, compare los colores desarrollados con la que muestra la tabla con que acompaña el frasco de las tiras.
3.4 – DETERMINACIÓN DE PH POR USO DE UN INDICADOR
A cada uno de los tubos del experimento 3.1, añádales dos gotas de indicador azul de bromotil, mezclar bien y anotar los colores desarrollados en cada uno de los tubos .
3.5 – EFECTOS DE UN BUFFER PARA OPONERSE A LOS CAMBIOS DE PH
1.- Con una tira de indicador universal, tome el PH de la solución de NaOH 0.4 N. Anote el resultado.
2.- Repita el procedimiento usando una tira nueva para tomar el PH de la solución de HCL 0.4 N. Anote el resultado.
3.- Al tubo numero 7 del experimento 3.1, retírele 5 ml usando una pipeta limpia, transfiéralos a un nuevo tubo de ensayo y rotúlelo con 7b; al tubo original marcado como tubo numero 7, identifíquelo apartir de este momento como tubo 7 a .
4.- A los 5 ml. Del tubo 7 a, añadir gota a gota con una pipeta, solución de NaOH 0.4 N, contar las gotas requeridas para que el color de la solución del tubo numero 7 a, se igual a la del tubo numero 1.
5.- A los 5 ml. Del tubo 7b, añadir gota a gota con una pipeta, solución de HCL 0.4 N, contar el numero de gotas requeridas para que el color de la solución del tubo 7b , vire asta amarillo intenso.
6.- A los 5 ml. Del tubo numero 1 original, añadirles con cuidado, gota a gota con una pipeta, solución de HCL 0.4 N y contar el numero de gotas necesarias para virar el color amarillo intenso.
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué gama de colores debe desarrollar el azul
de bromotimol de un pH ácido a un pH neutro y a un pH alcalino?
2.- Menciona otros
indicadores utilizados en el laboratorio y diga que colores presentan cada uno
de ellos a un pH ácido y a un pH alcalino
3.- ¿Qué ventajas tiene el
uso del potenciómetro? ¿Qué desventajas tiene? Escriba el procedimiento para
utilizar este aparato correctamente.
4.- En el experimento 3.5,
usted debió preparar en el tubo 7 una
solución amortiguadora de pH neutro. Investigue porque se necesitaron la
cantidad de mililitros utilizados para
que cambie de color indicando que de esa forma cambió su pH.
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No.5 AMINOÁCIDOS SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL
SE COMUNICA QUE LA ACADEMIA DECIDIÓ SUSPENDER LA REALIZACIÓN DE ESTA PRÁCTICA, EN SU LUGAR IMPRIMIR Y DESCARGAR LA 6. AISLAMIENTO DE CASEINA QUE SE REALIZARÁ DEL 21 AL 25 SEPTIEMBRE 2015. TRAER SU MUESTRA DE LECHE BRONCA PREFERENTE, SI O ES ASI SIRVE LA DE ENVASE DE CARTÓN .8INFORMACION ACTUALIZADA EL 15 SEPT. 2015).
AMINOACIDOS: SEPARACION POR CROMATOGRAFIA PAPEL
OBJETIVO
El alumno comprenderá el importante papel que desempeñan los aminoácidos en el cuerpo de los animales, conocerá algunas de sus propiedades y, en base a estas separara los aminoácidos presentes en una mezcla, usando la técnica de cromatografía en papel.
INFORMACION GENERAL
Los aminoácidos son los monómeros (unidades), de que están formadas las proteínas (y por ello también las enzimas).
Químicamente, se caracterizan por la presencia en su molécula de un grupo carboxilo en el carbono No 1 ó alfa, y un grupo amino, unido al carbono No 2 ó beta (de aquí su nombre de aminoácidos).
Existen en la naturaleza mas de 200 aminoácidos diferentes, sin embargo, dentro del cuerpo de los animales, solo existen 22 principales, de estos 22, 10 son considerados como esenciales.
El termino aminoácido esencial, se aplica en aquellos aminoácidos que no pueden ser sintetizados, o que son sintetizados en cantidad menor a la requerida, de ahí que forzosamente tengan que ingerirse en los alimentos que se consumen.
Para los animales domésticos revisten carácter de esencial los siguientes aminoácidos: Lisina, Triptofano, Histidina, Fenilalanina, Leucina, Isoleucina, Treonina, Metionina, Valina y Arginina
Los aminoácidos considerados no esenciales, si pueden ser sintetizados por los animales a partir de otros compuestos de la dieta.
Los animales pueden unirse entre si para formar péptidos (algunos autores consideran péptido como sinónimo de aminoácido, pero por lo general se usa el termino para designar a la unión de varios de ellos). La unión de 2 aminoácidos se designa como dipéptido, si son 3 tripéptido, etcétera. Cuando el número de aminoácidos unidos es grande, se designa como polipéptido, y si cumple ciertos requisitos, se llama proteína.
Los aminoácidos tienen diferentes propiedades físicas y químicas, las cuales pueden ser aprovechadas para diferenciarlos.
Los aminoácidos compuestos incoloros, cristalinos, a granel se presentan como polvo blanco. Las formas cristalinas son muy características y van desde agujas (tirosina), hasta placas hexagonales gruesas (cistina). El sabor varía desde dulce azucarado (glicina), pasando por el insípido (tirosina) hasta el amargo (arginina).
Tienen diferente afinidad por el agua y otro tipo de solventes, y pueden poseer carga eléctrica positiva algunos negativa otros, o bien, algunos son neutros (carecen de carga eléctrica).
El termino cromatografía fue propuesto por Tswett en 1903 para la separación de pigmentos vegetales en una columna de sílice.
Hoy en día, la técnica original ha sufrido numerosas modificaciones, mejoras y adaptaciones de tal forma que existen muchos tipos de cromatografía (de adsorción, de reparto, de intercambio iónico, de tamiz molecular), y muchas técnicas especiales para usar estos tipos (en columna, en papel, en capa fina, en gases). Algunas técnicas son muy costosas y sofisticadas, otras son sencillas y baratas.
La cromatografía puede aplicarse para separar carbohidratos, lípidos, aminoácidos, proteínas y otros compuestos.
Para esta practica, se pretende separar los aminoácidos presentes en una mezcla, por la cromatografía en papel.
Está basada en el hecho de que los diferentes aminoácidos se absorben en el papel con diferentes grados de afinidad para un solvente determinado.
MATERIALES REACTIVOS
Cámara cromatográfica Alanina
Cubeta para cámara cromatográfica Leucina
Papel Whatman para cromatografía Lisina
Estufa bacteriológica Valina
Regla Butanol
Ac. Acético
Agua destilada
Ninhidrina spray
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO
1. 1. Preparar una tira de papel Whatman para cromatografía, marcando con un lápiz una línea de aplicación a 2.5 cm de uno de los extremos
2. 2. Colocar una gota del problema (solución de mezcla de aminoácidos), exactamente en el centro de la línea de aplicación. Deje secar en el aire
3. 3. Colocar el papel en la cubeta de la cámara cromatográfica.
La cubeta deberá contener al liquido solvente (Butanol - Ac. Acético - Agua destilada 4:1:1)
4. 4. Después de hora y media quitar las tiras de la cámara, marcar el frente del solvente (con lápiz), y dejar secar las tiras a temperatura ambiente
5. 5. Asperjar las tiras con una solución de ninhidrina en spray.
Secar al aire
6. 6. Colocar las tiras en la estufa a 100° C durante 10 minutos.
7. 7. Con la ayuda de una regla, medir la distancia a la que avanzo el solvente con relación a la línea de aplicación y anotar el valor. Medir también la distancia de las manchas (las cuales representan los diferentes aminoácidos, con respecto a la línea de aplicación.)
8. 8. Calcular el valor de Rf (Rf representa la relación de distancia a que se ha movido un aminoácido con respecto a la distancia en que se ha movido el solvente). Este valor Rf, es especifico para cada aminoácido y para un solvente determinado, de aquí que podamos identificar de que aminoácidos se trata al comparar sus valores de Rf.
Distancia a que se movió el aminoácido
Rf = ----------------------------------------------------
Distancia a que se movió el solvente
AMINOACIDOS: SEPARACION POR CROMATOGRAFIA PAPEL
OBJETIVO
El alumno comprenderá el importante papel que desempeñan los aminoácidos en el cuerpo de los animales, conocerá algunas de sus propiedades y, en base a estas separara los aminoácidos presentes en una mezcla, usando la técnica de cromatografía en papel.
INFORMACION GENERAL
Los aminoácidos son los monómeros (unidades), de que están formadas las proteínas (y por ello también las enzimas).
Químicamente, se caracterizan por la presencia en su molécula de un grupo carboxilo en el carbono No 1 ó alfa, y un grupo amino, unido al carbono No 2 ó beta (de aquí su nombre de aminoácidos).
Existen en la naturaleza mas de 200 aminoácidos diferentes, sin embargo, dentro del cuerpo de los animales, solo existen 22 principales, de estos 22, 10 son considerados como esenciales.
El termino aminoácido esencial, se aplica en aquellos aminoácidos que no pueden ser sintetizados, o que son sintetizados en cantidad menor a la requerida, de ahí que forzosamente tengan que ingerirse en los alimentos que se consumen.
Para los animales domésticos revisten carácter de esencial los siguientes aminoácidos: Lisina, Triptofano, Histidina, Fenilalanina, Leucina, Isoleucina, Treonina, Metionina, Valina y Arginina
Los aminoácidos considerados no esenciales, si pueden ser sintetizados por los animales a partir de otros compuestos de la dieta.
Los animales pueden unirse entre si para formar péptidos (algunos autores consideran péptido como sinónimo de aminoácido, pero por lo general se usa el termino para designar a la unión de varios de ellos). La unión de 2 aminoácidos se designa como dipéptido, si son 3 tripéptido, etcétera. Cuando el número de aminoácidos unidos es grande, se designa como polipéptido, y si cumple ciertos requisitos, se llama proteína.
Los aminoácidos tienen diferentes propiedades físicas y químicas, las cuales pueden ser aprovechadas para diferenciarlos.
Los aminoácidos compuestos incoloros, cristalinos, a granel se presentan como polvo blanco. Las formas cristalinas son muy características y van desde agujas (tirosina), hasta placas hexagonales gruesas (cistina). El sabor varía desde dulce azucarado (glicina), pasando por el insípido (tirosina) hasta el amargo (arginina).
Tienen diferente afinidad por el agua y otro tipo de solventes, y pueden poseer carga eléctrica positiva algunos negativa otros, o bien, algunos son neutros (carecen de carga eléctrica).
El termino cromatografía fue propuesto por Tswett en 1903 para la separación de pigmentos vegetales en una columna de sílice.
Hoy en día, la técnica original ha sufrido numerosas modificaciones, mejoras y adaptaciones de tal forma que existen muchos tipos de cromatografía (de adsorción, de reparto, de intercambio iónico, de tamiz molecular), y muchas técnicas especiales para usar estos tipos (en columna, en papel, en capa fina, en gases). Algunas técnicas son muy costosas y sofisticadas, otras son sencillas y baratas.
La cromatografía puede aplicarse para separar carbohidratos, lípidos, aminoácidos, proteínas y otros compuestos.
Para esta practica, se pretende separar los aminoácidos presentes en una mezcla, por la cromatografía en papel.
Está basada en el hecho de que los diferentes aminoácidos se absorben en el papel con diferentes grados de afinidad para un solvente determinado.
MATERIALES REACTIVOS
Cámara cromatográfica Alanina
Cubeta para cámara cromatográfica Leucina
Papel Whatman para cromatografía Lisina
Estufa bacteriológica Valina
Regla Butanol
Ac. Acético
Agua destilada
Ninhidrina spray
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO
1. 1. Preparar una tira de papel Whatman para cromatografía, marcando con un lápiz una línea de aplicación a 2.5 cm de uno de los extremos
2. 2. Colocar una gota del problema (solución de mezcla de aminoácidos), exactamente en el centro de la línea de aplicación. Deje secar en el aire
3. 3. Colocar el papel en la cubeta de la cámara cromatográfica.
La cubeta deberá contener al liquido solvente (Butanol - Ac. Acético - Agua destilada 4:1:1)
4. 4. Después de hora y media quitar las tiras de la cámara, marcar el frente del solvente (con lápiz), y dejar secar las tiras a temperatura ambiente
5. 5. Asperjar las tiras con una solución de ninhidrina en spray.
Secar al aire
6. 6. Colocar las tiras en la estufa a 100° C durante 10 minutos.
7. 7. Con la ayuda de una regla, medir la distancia a la que avanzo el solvente con relación a la línea de aplicación y anotar el valor. Medir también la distancia de las manchas (las cuales representan los diferentes aminoácidos, con respecto a la línea de aplicación.)
8. 8. Calcular el valor de Rf (Rf representa la relación de distancia a que se ha movido un aminoácido con respecto a la distancia en que se ha movido el solvente). Este valor Rf, es especifico para cada aminoácido y para un solvente determinado, de aquí que podamos identificar de que aminoácidos se trata al comparar sus valores de Rf.
Distancia a que se movió el aminoácido
Rf = ----------------------------------------------------
Distancia a que se movió el solvente
Valor Rf Aminoácido al que corresponde este Rf (Con solvente
Butanol 4: ac.- acético 1: agua 1)
0.14
Lisina
0.38
Alanina
0.60
Valina
0.73
Leucina
CUESTIONARIO
CUESTIONARIO
1.- Investigue en que se
basa la técnica de cromatografía y para que se usa
2.- Investiga a que se debe
la aparición del color púrpura al rociar con ninhidrina el papel.
3.- ¿Qué aminoácido se
absorbió mas fuertemente y porque?
PRÁCTICA NO. 7 HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL
A REALIZARSE SEMANA 28 SEPTIEMBRE AL 2 DE OCTUBRE DE 2015
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 7
ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL
OBJETIVO
El alumno demostrara la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.
INFORMACION GENERAL
Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.
La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.
La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón.
La amilasa actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).
La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.
En el caso del hombre, la producción de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.
La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.
Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.
FUNDAMENTO DE LA PRACTICA
Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.
MATERIALES REACTIVOS
2 pipetas de 5 ml Solución de lugol
2 pipetas de 1 ml Saliva
2 vasos p.p. 100 ml Sol. Almidón al 2%
2 vasos p.p. 250 ml HCL 0.25 N
6 tubos de ensayo 13 x 100 mm NaOH 0.25 N
1 mechero
1 tripié
1 tela de asbesto
1 gradilla
1 termómetro
1 embudo
1 trozo de gasa
Cubos de hielo
4 tiras indicador de pH universal
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO
1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva.
2. Prepare un baño María a una temperatura de 40 grados centígrados
3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Sol. Almidón 2ml 2 ml 2 ml 2 ml
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Sol. HCL 1 ml
Sol. NaOH 1 ml
Saliva 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos
5. Coloque los tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitado con hielo picado.
6.-Agite los tubos ocasionalmente y tome el tiempo necesario para que el color negro o azul desaparezca. Anote en que tubos desparece el color violeta y en cuales no.
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 7
ENZIMAS: HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAL
OBJETIVO
El alumno demostrara la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.
INFORMACION GENERAL
Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.
La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.
La amilasa es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón.
La amilasa actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).
La amilasa se produce principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.
En el caso del hombre, la producción de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.
La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.
Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.
FUNDAMENTO DE LA PRACTICA
Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.
MATERIALES REACTIVOS
2 pipetas de 5 ml Solución de lugol
2 pipetas de 1 ml Saliva
2 vasos p.p. 100 ml Sol. Almidón al 2%
2 vasos p.p. 250 ml HCL 0.25 N
6 tubos de ensayo 13 x 100 mm NaOH 0.25 N
1 mechero
1 tripié
1 tela de asbesto
1 gradilla
1 termómetro
1 embudo
1 trozo de gasa
Cubos de hielo
4 tiras indicador de pH universal
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO
1. Coloque un trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa, recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete 10 ml de saliva.
2. Prepare un baño María a una temperatura de 40 grados centígrados
3. Rotule 4 tubos de ensayo y proceda según el siguiente esquema:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Sol. Almidón 2ml 2 ml 2 ml 2 ml
Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas
Sol. HCL 1 ml
Sol. NaOH 1 ml
Saliva 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
4. Introduzca una tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos
5. Coloque los tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en un vaso de precipitado con hielo picado.
6.-Agite los tubos ocasionalmente y tome el tiempo necesario para que el color negro o azul desaparezca. Anote en que tubos desparece el color violeta y en cuales no.
** Hidrólisis del almidón por la Amilasa
Salival **
1.- En función de su acción catalítica específica, las enzimas
se clasifican en 6 grandes grupos. Investíguelos y explique la forma de acción
que tiene cada uno de los grupos.
2.- En base a lo investigado anteriormente, ¿En
que clasificación se encuentra la amilasa? ¿Por qué?
3.-
¿Cuál es la diferencia entre la
S-amilasa y la P- amilasa?
4.- Investigue como se le llama a la sustancia
sobre la cual actúa una enzima.
5.- ¿Cuáles son los 3 principales factores que
afectan la actividad enzimática? Investigue a profundidad los cambios
bioquímicos que ocurren en las enzimas por el efecto de estos 3 factores.
6.- ¿De qué tipo de iones es dependiente la
amilasa para poder realizar su función?
7.-
¿Cuál es el pH óptimo de la amilasa?PRACTICA DE BIOQUÍMICA PARA VETERINARIA No 10 OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO
A REALIZARSE LA SEMANA 19 A 23 DE OCTUBRE DE 2015
OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO
OBJETIVO
El alumno demostrara la oxidación mitocondrial del succinato, utilizando un aceptor artificial de electrones, la cantidad del cual será determinada por espectrofotometría.
INFORMACION GENERAL
Los animales superiores son heterótrofos, es decir, no pueden sintetizar su propia energía (como lo hacen las plantas en la fotosíntesis), sino que deben ingerir esa energía en los alimentos que consumen, y posteriormente extraer parte de la misma mediante una compleja serie de reacciones bioquímicas.
La principal fuente de energía para los animales y el hombre son los carbohidratos, el metabolismo energético de estos compuestos incluye reacciones como la glucólisis, ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Dependiendo de si las condiciones microambientales son aerobias (con presencia de oxigeno), o anaerobias (en ausencia de oxigeno), las reacciones proseguirán por una vía, o bien, se detendrán a cierto nivel.
La mitocondria, es un pequeño organelo celular en donde se llevan a cabo las reacciones que requieren la presencia de oxigeno. En la mitocondria se hallan numerosas enzimas que hacen posible la oxidación de los metabolitos del ciclo de Krebs.
La oxidación puede implicar: ganancia de oxigeno, perdida de hidrogeno, o mas específicamente, perdida de electrones.
La producción de energía por parte de la mitocondria, implica el transporte de electrones a lo largo de una cadena de reacciones y de varias maneras, una de ellas, es la colorimétrica, usando un aceptor artificial de electrones, el cual cambia de color cuando capta dichos electrones.
Para medirá con exactitud el grado en el cual se produce el cambio de color, se usara un aparato muy común en el laboratorio de bioquímica, el espectrofotómetro.
Sin entrar en muchos detalles, este aparato nos mide la cantidad de luz que atraviesa un medio coloreado (trasmitancia), o bien, nos puede medir la cantidad de luz que es retenida o absorbida por ese medio coloreado (absorbancia).
A mayor cantidad de substancias coloreadas tenga una muestra, mayor cantidad de luz será capaz de absorber, pero ello también dependerá del espesor de la cubeta (los tubos de cuarzo donde se colocan las muestras dentro del aparato).
Para el caso de la práctica, se usará como aceptor artificial de electrones al ferrocianuro (se usará ferrocianuro de potasio).
Esta substancia es de color amarillo, y a medida que va aceptando electrones, va haciéndose cada vez más pálida. A mayor cantidad de electrones aceptados, más pálida se vulva la solución, esta disminución de color se puede mediar con gran exactitud usando el espectrofotómetro.
MATERIALES REACTIVO
4 tubos de ensayo 120 x 10mm
1 gradilla
3 pipetas de 1ml
2 pipetas de 0.1ml
2 vasos p.p. 250ml
1 termómetro
1 baño Maria
1 mortero y mano
1 centrifuga con tubos
1 trozo de gasa
1 espectrofotómetro con cubetas
1 licuadora
Buffer de fosfatos pH 7.4 0.1M
Succinato en buffer 0.01M
Malonato en buffer 0.01M
Cianuro de potasio
Ferrocianuro de potasio 0.01M
Ácido tricloroacético al 10%
hielo picado
MATERIAL BIOLÓGICO
Trozo de corazón de res (fresco).
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.
1. Pese 10 gramos de corazón de res fresco (puede ser de otra especie).
2. Pique finamente el trozo de corazón, añada 190ml de buffer de fosfatos bien frío.
3. Coloque en un vaso licuador y licue por 1 minuto.
4. Filtre a través de gasa fina y recoja el filtrado en un vaso de precipitados.
5. Coloque en baño Maria de hielo el vaso de precipitados que contiene el filtrado (homogenizado).
6. Numere 3 tubos de ensayo y proceda como muestra el esquema:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Buffer de fosfatos 3ml 2ml 1.9ml
Succinato en buffer 1ml 1ml
Malonato en buffer 0.1ml
___________________________________________________________________
Homogenizado del paso No 5 1 ml 1 ml 1 ml
NOTA: Checar que esté bien mezclado.
___________________________________________________________________
Cianuro de potasio 1 gota 1 gota 1 gota
7. Colocar los tubos en un baño Maria a 37°C por 5 minutos.
8. Añadir a cada tubo 1ml de ferrocianuro de potasio. Mezcle bien, anotar el tiempo al que se hizo la adición.
9. Diez minutos después agregue a cada tubo 5ml de ácido tricloroacético. Mezcle bien.
10. Centrifugue cada tubo por 5 minutos a 2,000 r.p.m.
11. Obtenga el sobrenadante de cada tubo y tome la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 420nm. NOTA: UTILICE AGUA DESTILADA COMO BLANCO PARA CALIBRAR EL APARATO.
12. Calcule el numero de micromoles de ferrocianuro que quedan en cada tubo, para ello considere lo siguiente:
a) La Extinción molar (E) del ión ferrocianuro es de 1 X 10 3 litros mol -1 cm -1 a 420nm.
b) El volumen total en cada tubo, luego de la adición del ácido tricloroacético es de 10ml.
c) La longitud del rayo de luz que atraviesa la cubeta es de 1-1.2 cm. (Consulte a su instructor para el caso de las cubetas que usted está usando)
FORMULA A EMPLEAR PARA LOS CALCULOS
C = A
EB
C = Concentración
A = Absorbancia medida en el espectrofotómetro
E = Extinción molar (1 X 10 3 mol -1 cm -1)
B = Espesor de la cubeta (cms)
Micromoles de Fe (CN) 3 al final de la reacción usados por el sistema
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
OXIDACION MITOCONDRIAL DEL SUCCINATO
OBJETIVO
El alumno demostrara la oxidación mitocondrial del succinato, utilizando un aceptor artificial de electrones, la cantidad del cual será determinada por espectrofotometría.
INFORMACION GENERAL
Los animales superiores son heterótrofos, es decir, no pueden sintetizar su propia energía (como lo hacen las plantas en la fotosíntesis), sino que deben ingerir esa energía en los alimentos que consumen, y posteriormente extraer parte de la misma mediante una compleja serie de reacciones bioquímicas.
La principal fuente de energía para los animales y el hombre son los carbohidratos, el metabolismo energético de estos compuestos incluye reacciones como la glucólisis, ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Dependiendo de si las condiciones microambientales son aerobias (con presencia de oxigeno), o anaerobias (en ausencia de oxigeno), las reacciones proseguirán por una vía, o bien, se detendrán a cierto nivel.
La mitocondria, es un pequeño organelo celular en donde se llevan a cabo las reacciones que requieren la presencia de oxigeno. En la mitocondria se hallan numerosas enzimas que hacen posible la oxidación de los metabolitos del ciclo de Krebs.
La oxidación puede implicar: ganancia de oxigeno, perdida de hidrogeno, o mas específicamente, perdida de electrones.
La producción de energía por parte de la mitocondria, implica el transporte de electrones a lo largo de una cadena de reacciones y de varias maneras, una de ellas, es la colorimétrica, usando un aceptor artificial de electrones, el cual cambia de color cuando capta dichos electrones.
Para medirá con exactitud el grado en el cual se produce el cambio de color, se usara un aparato muy común en el laboratorio de bioquímica, el espectrofotómetro.
Sin entrar en muchos detalles, este aparato nos mide la cantidad de luz que atraviesa un medio coloreado (trasmitancia), o bien, nos puede medir la cantidad de luz que es retenida o absorbida por ese medio coloreado (absorbancia).
A mayor cantidad de substancias coloreadas tenga una muestra, mayor cantidad de luz será capaz de absorber, pero ello también dependerá del espesor de la cubeta (los tubos de cuarzo donde se colocan las muestras dentro del aparato).
Para el caso de la práctica, se usará como aceptor artificial de electrones al ferrocianuro (se usará ferrocianuro de potasio).
Esta substancia es de color amarillo, y a medida que va aceptando electrones, va haciéndose cada vez más pálida. A mayor cantidad de electrones aceptados, más pálida se vulva la solución, esta disminución de color se puede mediar con gran exactitud usando el espectrofotómetro.
MATERIALES REACTIVO
4 tubos de ensayo 120 x 10mm
1 gradilla
3 pipetas de 1ml
2 pipetas de 0.1ml
2 vasos p.p. 250ml
1 termómetro
1 baño Maria
1 mortero y mano
1 centrifuga con tubos
1 trozo de gasa
1 espectrofotómetro con cubetas
1 licuadora
Buffer de fosfatos pH 7.4 0.1M
Succinato en buffer 0.01M
Malonato en buffer 0.01M
Cianuro de potasio
Ferrocianuro de potasio 0.01M
Ácido tricloroacético al 10%
hielo picado
MATERIAL BIOLÓGICO
Trozo de corazón de res (fresco).
DESARROLLO DEL EXPERIMENTO.
1. Pese 10 gramos de corazón de res fresco (puede ser de otra especie).
2. Pique finamente el trozo de corazón, añada 190ml de buffer de fosfatos bien frío.
3. Coloque en un vaso licuador y licue por 1 minuto.
4. Filtre a través de gasa fina y recoja el filtrado en un vaso de precipitados.
5. Coloque en baño Maria de hielo el vaso de precipitados que contiene el filtrado (homogenizado).
6. Numere 3 tubos de ensayo y proceda como muestra el esquema:
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Buffer de fosfatos 3ml 2ml 1.9ml
Succinato en buffer 1ml 1ml
Malonato en buffer 0.1ml
___________________________________________________________________
Homogenizado del paso No 5 1 ml 1 ml 1 ml
NOTA: Checar que esté bien mezclado.
___________________________________________________________________
Cianuro de potasio 1 gota 1 gota 1 gota
7. Colocar los tubos en un baño Maria a 37°C por 5 minutos.
8. Añadir a cada tubo 1ml de ferrocianuro de potasio. Mezcle bien, anotar el tiempo al que se hizo la adición.
9. Diez minutos después agregue a cada tubo 5ml de ácido tricloroacético. Mezcle bien.
10. Centrifugue cada tubo por 5 minutos a 2,000 r.p.m.
11. Obtenga el sobrenadante de cada tubo y tome la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 420nm. NOTA: UTILICE AGUA DESTILADA COMO BLANCO PARA CALIBRAR EL APARATO.
12. Calcule el numero de micromoles de ferrocianuro que quedan en cada tubo, para ello considere lo siguiente:
a) La Extinción molar (E) del ión ferrocianuro es de 1 X 10 3 litros mol -1 cm -1 a 420nm.
b) El volumen total en cada tubo, luego de la adición del ácido tricloroacético es de 10ml.
c) La longitud del rayo de luz que atraviesa la cubeta es de 1-1.2 cm. (Consulte a su instructor para el caso de las cubetas que usted está usando)
FORMULA A EMPLEAR PARA LOS CALCULOS
C = A
EB
C = Concentración
A = Absorbancia medida en el espectrofotómetro
E = Extinción molar (1 X 10 3 mol -1 cm -1)
B = Espesor de la cubeta (cms)
Micromoles de Fe (CN) 3 al final de la reacción usados por el sistema
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
** Oxidación Mitocondrial del Succinato**
1.- ¿Qué es el succinato?
2.- Menciona las ventajas y desventajas de
utilizar al oxígeno para obtener energía en los organismos superiores
3.- ¿Porqué en ésta práctica se utiliza como
mejor material biológico al corazón? Explica tu respuesta
4.- ¿Porqué se considera al ciclo de Krebs y a
la cadena de transporte de electrones
como metabolismo aerobio?
5.- ¿Quién actúa como inhibidor de la succinato
deshidrogenasa y de qué manera lo hace?
6.- Menciona los 3 factores que en el ciclo de
krebs activan a la succinato deshidrogenasa
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 11 LIPIDOS
A REALIZARSE SEMANA 26 A 30 DE OCTUBRE DE 2015
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 11 LIPIDOS
PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 11 LIPIDOS
El término lípido se aplica a una gran variedad de
compuestos químicamente muy heterogéneos, que comparten una propiedad física
común, son insolubles en agua, pero son solubles en solventes orgánicos como
éter, cloroformo, benceno etcétera. Los lípidos son componentes muy importantes
en las células sobre todo como elementos estructurales en la composición de las
membranas celulares ejemplo : fosfolípidos, pero también como compuestos
metabólicos ejemplos: colesterol, vitamina A. Los lípidos se clasifican en tres grandes grupos :
Lípidos simples.-aquellos
que solo están formados por ésteres de alcohol y ácidos grasos
Lípidos compuestos.-aquellos
que además del alcohol y ácido graso, poseen otro componente extra por ejemplo
carbohidratos (se llamarían glucolípidos) fosfato (se llamarían fosfolípídos)
Lípidos derivados.-
son aquellos ligeramente emparentados con un hidrocarburo llamado isopreno, por
ello se les designa también como isoprenoides, en esta categoría entran
sustancias como las vitaminas liposolubles (A,D, E, K) el colesterol y sus
derivados, así como las hormonas esteroides.
Materiales
Aceite vegetal 15 ml
9 Tubos de ensayo 15 X 10 mm
1 Gradilla para tubos ensayo
1 Pinzas para tubo ensayo
1 Vaso precipitados 250 ml
1 Vaso precipitados 500ml
1 Mechero
1 Tela asbesto
1 Tripié
1 Chispa
7 pipetas 5 ml
1 probeta 25 ml
1 varilla vidrio aprox. 15 cms., longitud 3 mm diámetro
5 pipetas 2 ml
Reactivos
Hidróxido de sodio 5 gramos
Alcohol etílico 25
ml
Aceite vegetal 15 ml
Colesterol 100 miligramos
Acido sulfúrico concentrado
4 ml
Anhidrido acético 1 ml
Eter 40 ml
Cloroformo 6 ml
Benceno 6 ml
Cloruro calcio 0.5 gramos
Experimento uno.-
Solubilidad de lípidos
1.-Prepare 3 tubos de ensayo rotulándolos y añadiendo las
substancias según la siguiente tabla
Tubo
|
Aceite vegetal
|
Agua
|
Cloroformo
|
Benceno
|
1
|
2 ml
|
5 ml
|
||
2
|
2 ml
|
5 ml
|
||
3
|
2ml
|
5 ml
|
||
Coloque un tapón en cada tubo, y agite vigorosamente cada tubo para
mezclar el contenido.
Deje reposar los tubos en una gradilla durante 3 minutos , observe y
anote sus observaciones para cada tubo
¿Se solubilizó el aceite en todos los tubos o solo en alguno o
algunos?
|
||||
Experimento
dos.-Saponificación de lípidos
1.-Coloque en un vaso de precipitados de 250 ml, 5 ml de
aceite vegetal
2.-Agregue 15 ml de solución alcohólica de hidróxido de
sodio (NaOH)
3.-En un vaso de precipitados de 500 ml coloque 100 ml de
agua, coloque el vaso en un soporte y ponga el vaso a la flama de un mechero
hasta que el agua hierva.
4.-Cuando el agua este hirviendo introduzca USANDO PINZAS el vaso de precipitados de 250
ml dentro del vaso que contiene el agua
en ebullición.
5.-Agite ocasionalmente con una varilla de vidrio el
contenido del vaso de 250 ml hasta que
se forme una masa semisólida
6.-Con la varilla de vidrio transfiera una pequeña porción
de la masa de vaso de precipitados a un tubo de ensayo.
7.-Agregue 5 ml de agua al tubo de ensayo y agite
vigorosamente. Observe que ocurre y
anote sus observaciones
8.-En un tubo de
ensayo diferente con la varilla de vidrio transfiera una pequeña porción de
la masa del vaso de precipitados
9.- Agregue 5 ml de agua al tubo de ensayo NO LO AGITE AÚN. Añada 1 ml de
cloruro de calcio al tubo de ensayo y agite vigorosamente. Observe que ocurre y anote sus observaciones
Experimento
tres.-Identificación del colesterol
a.-Prueba de
Salkowski.
1.-Coloque en un tubo de ensayo 2 ml de una solución de
colesterol medidos con una pipeta
2.- Con una pipeta Muy
lentamente y con cuidado. NO LO ASPIRE CON BOCA USE UN BULBO añada 2 ml de
ácido sulfúrico concentrado al tubo de ensayo.
Observe y anote el color obtenido.
b.-Prueba de Liebermann-Burchard
1.-Coloque en un tubo de ensayo 2 ml de una solución de
colesterol medidos con una pipeta
2.-Añada con cuidado 10 gotas de anhídrido acético.
3.-Añada con cuidado 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
4.-Tape el tubo y agite muy suavemente para mezclar
Observe y anote el color obtenido.
Cuestionario
1.-Cuál es la razón por la que los lípidos son solubles en
solventes apolares
2.-Que significa el término apolar aplicado a una molécula
de lípido
3.-En el caso de los lípidos que es una molécula anfipática
4.-Defina lo que es la saponificación
5.-Explique porque en el caso del tubo del paso 9 del
experimento de saponificación no se forma espuma
6.-Explique que cambios químicos (asociados a los cambios de
color) se producen en la molécula del
colesterol en los casos de la reacción de Salkowski y de Lieberman-Burchard
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